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牛结核病是一种人畜共患的慢性传染病，人畜交叉传播是造成结核病广泛流行的重要原因之一。
以牛型分枝杆菌Vallee株基因组DNA为模板，应用PCR方法扩增MPB64基因，PCR产物经DNA纯化试剂盒纯化后与载体pMD18-T连接，并转化入DH5α感受态细胞中，并用X-gal，IPTG进行蓝白筛选，涂布于含氨苄青霉素(50μg/ml)的LB平板上，37℃过夜培养，挑取白色菌落接种于5ml含氨苄青霉素LB的液体培养基中，小量法提取质粒DNA，重组质粒经KpnI/EcoRI进行酶切鉴定、测序正确后命名为MPB64-T。
MPB64-T经KpnI/EcoRI酶切后，回收MPB64片段，与原核表达载体pET32a连接，转化BL21(DE3)感受态细胞中，涂布于含氨苄青霉素的LB平板上，构建原核重组表达质粒MPB64-pET32a，进行KpnI/EcoRI酶切鉴定，PCR鉴定阳性后，再转化入大肠杆菌BL21(DE3)中，以1mmol/lIPTG诱导，进行SDS-PAGE电泳检测。结果表明，表达的MPB64-pET32a融合蛋白相对分子量为40kD，与预测相符。
用Ni柱对MPB64融合蛋白进行纯化，为检测纯化的MPB64融合蛋白的免疫活性，进行了western-Blotting分析，结果表明该融合蛋白有生物学活性，故用纯化的抗原接种兔制备抗血清，并用western-Blotting，ELISA检测其特异性及效价。
总之，成功克隆了MPB64基因，获得了表达的融合蛋白MPB64-pET32a用Ni柱进行纯化获得了较纯的融合蛋白MPB64-pET32a，western-Blotting检测知纯化的融合蛋白MPB64-pET32a有免疫活性，用该纯化的蛋白抗原接种动物制备抗血清，western-Blotting和ELISA检测得知该血清与蛋白抗原有很好的亲和力。