论文部分内容阅读
研究背景与目的乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,它是一种异质性的疾病,可以细分为四种分子亚型:luminal A型、luminal B型、HER-2过表达型和Basal-like型;其中Basal-like型,也被称作三阴性乳腺癌(TNBC)的预后更差。三阴性乳腺癌具有较高的转移与复发率,目前除化疗外缺乏有效的治疗靶点;所以,为三阴性乳腺癌患者寻找一种新的治疗靶点至关重要。表观遗传学改变是肿瘤发生发展的重要方面,组蛋白去甲基化酶KDM2B作为JMJc家族的一个去甲基化酶,它可以参与肿瘤的发生与发展,并且在不同类型细胞中的功能及作用机制也不相同。本研究主要探索KDM2B在三阴性乳腺癌细胞增殖中的作用以及调节机制,并且可能为三阴性乳腺癌的治疗寻找到新的靶点。方法1、利用生物信息学的方法在BCIP中分析KDM2B在三阴性乳腺癌中的表达以及其与三阴性乳腺癌生存率的关系。2、CCK-8实验、平板克隆实验检测KDM2B对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响,细胞周期实验检测KDM2B对细胞周期进程的影响。3、实时荧光定量PCR筛选三阴性乳腺癌细胞中受KDM2B调节的增殖相关基因,蛋白印记检测相关基因蛋白表达水平的改变。4、染色质免疫共沉淀探索三阴性乳腺癌细胞中KDM2B与相关基因启动子的作用关系以及影响转录的机制,双荧光素酶报告基因分析确定KDM2B与相关基因启动子的直接作用。5、恢复实验进一步验证KDM2B对三阴性乳腺癌细胞增殖的作用是否是通过调节相关基因的转录来实现的。结果1、KDM2B在乳腺癌中是高表达的,其中在三阴性乳腺癌中的表达高于非三阴性乳腺癌;高表达的KDM2B与三阴性乳腺癌的预后呈负相关。2、KDM2B可以促进三阴性乳腺癌细胞的增殖,其影响增殖的方式是通过促进三阴性乳腺癌细胞从G0/G1期向S期和G2/M期转变,促进细胞周期的进程。3、KDM2B可以降低三阴性乳腺癌细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p15INK4B、p16INK4A和p57KtP2的转录水平;蛋白表达水平与转录水平的改变相一致。4、KDM2B通过结合到p15INK4B、p16INK4A和p57KIP2的特定启动子区域,并且降低这些基因启动子区域的H3K4me3和H3K36me2的甲基化水平,抑制基因的转录。5、在KDM2B敲低的三阴性乳腺癌细胞系中沉默p15INK4B、p16INK4A和p57KIP2的表达后,细胞的增殖能力增强;同时也引起G0/G1期细胞比例降低,G2/M期细胞比例增加,表明KDM2B对三阴性乳腺癌细胞增殖的作用是通过调节p15INK415、p16INK4A和p57KIP2转录来实现的。结论组蛋白去甲基化酶KDM2B通过下调H3K4me3和H3K36me2 水平,抑制p15INK4B、p16INK4A和p57KIP2的转录,促进了三阴性乳腺癌细胞的增殖,这种调节机制加深了我们对三阴性乳腺癌发生发展的认识,并且可能为三阴性乳腺癌患者寻找新的治疗靶点。