【摘 要】
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目的:建立11个模式识别受体基因单核苷酸多态性（SNP）位点的分子诊断方法,探讨11个SNP与感染性疾病严重程度之间的相关性。方法:应用在线Primer-BLAST软件针对11个SNP位点（rs606231248、rs3211938、rs3775291、rs4986790、rs4986791、rs2072493、rs5744174、rs5744168、rs3796508、rs5743845和rs5
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目的:建立11个模式识别受体基因单核苷酸多态性（SNP）位点的分子诊断方法,探讨11个SNP与感染性疾病严重程度之间的相关性。方法:应用在线Primer-BLAST软件针对11个SNP位点（rs606231248、rs3211938、rs3775291、rs4986790、rs4986791、rs2072493、rs5744174、rs5744168、rs3796508、rs5743845和rs5743842）设计引物,建立聚合酶链式反应-高分辨率熔解（PCR-HRM）分子诊断检测方法,并以Sanger测序法作为金标准评价自建体系的检验性能（灵敏度、特异性、重复性和再现性）。使用自建体系对113例重型感染患者和同期287例轻型感染患者进行基因分型,以轻型感染作为对照,并根据感染患者的炎症指标（CRP、PCT、IL-6、NLR、PLR和LMR）水平进行分层,分析各SNP与兰州地区感染性疾病严重程度和炎症水平的相关性。统计学处理使用SPSS软件的卡方检验和二元Logistic回归,进行组间比较和相关性分析。使用在线SHEsis软件进行连锁不平衡和单倍型分析。结果:（1）成功建立11个SNP位点的PCR-HRM检测体系并完成400例感染性疾病患者的基因分型。通过Sanger测序验证,自建体系准确率、灵敏度和特异性为100%,重复性和再现性均较好。（2）以患者感染严重程度分组,对11个SNP位点进行组间分析,发现rs3775291和rs606231248基因型频率及等位基因频率在轻型和重型感染组间的分布差异具有统计学意义（P＜0.05）。（3）炎症指标与感染程度关联性分析发现,CRP、PCT、IL-6和NLR水平与感染严重程度正向关联,PLR水平与感染严重程度负向关联（P＜0.05）。（4）分别以炎症指标CRP、PCT、IL-6、NLR、PLR和LMR分层,发现rs2072493的等位基因频率在CRP高值与正常值组间、PCT高值与正常值组间均有统计学差异,rs606231248的基因型频率和等位基因频率在PCT高值与正常值组间、IL-6高值与正常值组间具有统计学差异,rs3775291的基因型频率和等位基因频率在NLR高值与低值组间、LMR高值与低值组间具有统计学差异,rs3796508的基因型频率和等位基因频率在LMR高值与低值组间具有统计学差异（P＜0.05）。（5）感染程度和炎症指标水平遗传模型回归分析表示,rs3775291的纯合突变型TT、杂合突变型CT和rs606231248的野生型GG是感染及炎症反应程度加重的危险因素,rs3775291野生型CC和rs606231248的纯合突变型AA是感染及炎症反应程度加重的保护因素。（6）连锁不平衡和单倍型分析结果显示,位于4号染色体上的rs3775291和rs3796508不存在连锁不平衡关系,其单倍型CC是感染性疾病进展的保护因素,单倍型TC是感染性疾病进展的危险因素。结论:本研究自建的模式识别受体基因11个SNP位点的分子诊断方法具有较好的检验性能评价,可用于感染性疾病患者临床标本的常规化检测。研究发现,rs3775291、rs2072493、rs606231248和rs3796508基因多态性与兰州地区感染性疾病的严重程度和炎症水平相关。
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