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目的研究不同时段LMWH给药干预对ANP大鼠血PAF、ET-1、NO、TXA2、PGI2变化影响,观察ANP大鼠72小时生存时间并统计生存率,探讨不同时段LMWH给药干预对ANP大鼠胰腺微循环的作用,为临床LMWH最佳时段治疗重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)提供理论依据和实验基础。方法健康SD大鼠160只,体重250-300g,随机分成LMWH组(L组),n=64只;生理盐水(normal saline ,NS)组(N组),n=64只;假手术(sham operation, SO)组(S组),n=32只。L组和N组根据不同给药时点又随机再各分成四个组即L0h组(n=16)、L6h组(n=16)、L12h组(n=16)、L18h组(n=16)和N0h组(n=16)、N6h组(n=16)、N12h组(n=16)、N18h组(n=16)。L和N组大鼠均采用5%牛磺胆酸钠(0.1ml/100g)微泵下逆行胰胆管注射法建立ANP模型,S组大鼠开腹仅翻动胰腺建模。L组大鼠分别于ANP成模后0时(L0h)、6时(L6h)、12时(L12h)、18时(L18h)皮下注射LMWH(尤尼舒50IU/ml,10IU/100g体重/次),各组每6小时重复注射一次,直至成模后24小时;N组大鼠ANP成模后各时点,同L组皮下注射NS(0.2ml /100g体重/次)。三组大鼠均于ANP成模后24小时,随机取每组大鼠数量的1/2再次开腹,观察腹水量及颜色、腹腔内皂化斑以及胰腺大体改变,取门静脉血检测血PAF、TXB2(TXA2)、6-Keto-PGF1α(PGI2)、ET-1、NO、血AMY和血Ca2+浓度,取胰腺组织HE染色病理学检查并行胰腺组织病理学评分,透射电镜观察胰腺微血管血栓,三组余下1/2数量大鼠继续禁食、自由饮水,观察72生存时间并统计生存率。结果1腹腔大体情况:L、N、S三组大鼠ANP建模后24h随机各取1/2再次剖腹所见:L组大鼠腹腔内可见黄色微混浊性腹水,肠系膜上点状皂化斑,胰腺点片状出血坏死;N组大鼠腹腔内可见淡红色血性腹水,肠系膜上片皂化斑形成,胰腺片状出血、坏死;S组大鼠未见上述改变。2血液指标检测血Ca2+和AMY:L组大鼠各时段血Ca2+浓度均高于N组大鼠相应各时段Ca2+浓度(P<0.01);L组大鼠各时段血AMY浓度亦均低于N组相应各时段AMY浓度(P<0.01);L和N两组大鼠血Ca2+、AMY浓度各组内不同时段两两比较无统计学差异(P>0.05)。血PAF:L组大鼠各时段组血PAF浓度均低于N组大鼠相应时段组浓度(P<0.01),L0h组(6.559±0.748)和L6h组(6.369±0.712)均低于L12h组(7.323±0.323)(P<0.01)和L18h组(7.343±0.615)(P<0.05); L0h组(6.559±0.748)与L6h组(6.369±0.712)之间及L12h组(7.323±0.323)与L18h组(7.343±0.615)之间比较无统计学差异(P>0.05)。血TXB2(TXA2)、6-Keto-PGF1α:L组大鼠血TXB2(TXA2)、6-Keto-PGF1α各时段组浓度均低于N组大鼠相应各时段组血TXB2(TXA2)、6-Keto-PGF1浓度(P<0.01);L0h组血TXB2(TXA2)(39.386±2.089)和血6-Keto-PGF1α(52.550±1.047)与L6h组血TXB(2TXA2()40.220±2.338)和血6-Keto-PGF1α浓度(52.374±1.604)均低于L12h组血TXB2(TXA2)(57.384±3.838)(P<0.01)和血6-Keto-PGF1α(57.743±1.504)(P<0.01)与L18h组血TXB2(TXA2)(57.924±4.262)(P<0.01)和血6-Keto-PGF1α浓度(58.093±1.189)(P<0.01);而L0h组与L6h组之间及L12h组与L18h组之间组血TXB2、血6-Keto-PGF1α浓度比较无统计学差异(P>0.05)。血ET-1、NO: L组大鼠血ET-1、NO各时段组浓度均低于N组大鼠相应各时段组血ET-1、NO浓度(P<0.05); L0h组(81.753±7.227)和L6h组大鼠血ET-1浓度(80.358±8.270)均低于L12h组(92.971±6.849)(P<0.05)和L18h组(95.553±6.903)(P<0.01);但L0h组与L6h组之间及L12h组与L18h组之间组血ET-1浓度比较无统计学差异(P>0.05);各时段组大鼠NO浓度两两比较均无统计学差异(P>0.05)。3组织学检查胰腺组织HE染色病理学检查:N组大鼠可见胰腺腺泡细胞破裂,腺泡结构消失,大片状出血坏死明显,大量中性粒细胞浸润;L组大鼠可见胰腺腺泡细破裂较N组少,成点片状出血坏死,尚存较少的正常腺泡细胞,较多中性粒细胞浸润;S组大鼠胰腺腺叶结构存在,腺泡细胞完整,未见坏死、出血及炎症细胞浸润。胰腺组织病理学评分: L0h组(6.000±0.926)、L6h组(6.500±1.069)、L12h组(8.750±1.283)、L18h组(8.250±1.670)大鼠胰腺组织病理学评分分别低于N组相应各时段N0h组(10.000±0.756) (P<0.01)、N6h组(10.250±1.282)(P<0.01)、N12h组(10.500±1.195)(P<0.01)、N18h(8.250±1.670)(P<0.01)组大鼠胰腺组织病理学评分;而L0h组(6.000±0.926)和L6h组(6.500±1.069)大鼠胰腺组织病理学评分均低于L12h组(8.750±1.283)(P<0.01)和L18h组(8.250±1.670)(P<0.01),但L0h组(6.000±0.926)与L6h组(6.500±1.069)之间及L12h组(8.750±1.283)与L18h组(8.250±1.670)大鼠之间胰腺组织病理学评分比较无统计学差异(P>0.05)。透射电镜:N组大鼠可见胰腺腺泡细胞结构破坏,正常胰腺腺泡消失,大量坏死组织,大量微血栓形成,血管破裂,残存微血管内有中性粒细胞滞留;L组大鼠可见血管内微血栓形成较N组少,尚存少量正常胰腺腺泡细胞。S组大鼠血管内无血栓形成,胰腺腺泡细胞、结构完整。三组大鼠各时段胰腺组织病理学评分与血PAF、ET-1/NO、TXB2/6-Keto-PGF1α(TXA2/PGI2)相关系数r分别为0.808、0.835、0.736,均呈正相关关系(P<0.01)。大鼠生存时间:L组48h、72h生存率分别为71.87%和46.87%,高于N组48h (43.75%)(P<0.05)和72h(21.87%) (P<0.05)生存率,但低于SO组48 h(100%) (P<0.05)和72 h (100%)(P<0.05)生存率。结论(1)LMWH皮下注射可通过降低ANP大鼠血PGI2、ET-1、NO、TXA2、浓度和ET-1/NO、TXA2/PGI2改善胰腺微循环,从而减轻胰腺病理损害。(2)在降低ANP大鼠血ET-1、NO、TXA2、PGI2浓度及ET-1/NO、TXA2/PGI2比值减轻胰腺病理损害方面,LMWH于大鼠ANP成模后0时始和6时始皮下给药效果优于12时始和18时始皮下给药。(3)LMWH能有效改善ANP大鼠其预后,提高生存率。