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目的:应用组织微阵列组(Tissue Micro array Group TMAG)和细胞核微阵列(Nucleus Microarray NMA)技术,通过免疫组化(Immunohistochemistry IHC)和荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization FISH)分别检测乳腺癌组织中HER-2基因状态和蛋白表达,观察两种检测结果相互关系及临床意义。材料和方法:1.研究材料收集沈阳军区总医院2006年6月～2008年8月诊断明确的乳腺癌标本,共248例,均为女性,年龄31~84岁,平均48.3岁。2.制作TMAG和IHC染色将来源不同的(Tissue microarray TMA)切片排列在同一张载玻片上,同时缩小相邻组织芯的距离,增加组织芯的数量,制成TMAG。采用S-P法进行IHC染色。IHC染色结果参照美国FDA标准:光镜下观察以细胞膜棕黄染色为阳性,分为IHC-~+++。结果判断以IHC+++为阳性,-~++级染色为阴性。3.制作NMA和FISH染色对石蜡包埋组织进行较厚的切片,经脱蜡及消化,从中提取出完整的细胞核。将提取细胞核的悬液滴注在预制的石蜡模孔中,然后细胞核固定、脱蜡便制成细胞核微阵列。NMA较好的适用于荧光原位杂染色。FISH探针为混合探针,标记整个HER-2基因序列为橙色荧光;另一个标记17号染色体着丝粒基因序列为绿色荧光。检测结果是列出20个间期细胞核中HER-2拷贝数与着丝粒的比率,乳腺癌HER-2扩增的病例橙色荧光与绿色荧光信号比率大于或等于2.0;正常的细胞核两种信号比率小于2.0;结果在临界点(1.8~2.2)时应视为可疑。4.统计学处理两种方法检测结果的相关性分析用SPSS 11.5统计软件包进行χ~2检验。结果:1. IHC检测结果248例乳腺癌标本中,IHC-为90例, IHC+为49例, IHC++为37例, IHC+++为72例。根据IHC结果判断标准,阳性72例,阴性176例,阳性率为29.0 %。2. FISH检测结果248例乳腺癌病理标本中,FISH阴性172例, FISH阳性76例,FISH阳性率为30.6 %。3.IHC与FISH的结果比较在IHC+++的72例中,有59例为FISH阳性; IHC - ~++的176例标本中,有159例为FISH阴性。IHC与FISH检测结果总符合率为87.9 %,IHC与FISH检测结果两者之间存在显著性相关性。IHC++与FISH检测结果无明显相关性(P>0.01)。4. 17号染色体单体型染色体与多倍体型IHC++中4例为17号染色体单体型染色体,其FISH检测均为阳性,占FISH阳性病例总数5.26%。IHC +++中5例17号染色体多倍体型染色体,FISH检测均为阴性,占FISH阴性总例数2.9%。结论1. TMAG和NMA技术适用于乳腺癌组织的IHC和FISH检测。同样具有结果同一性好、准确和低成本的优点。2.乳腺癌IHC为-~+和+++情况时, IHC与FISH检测结果有良好的一致性。3.乳腺癌IHC++时,需进行FISH检测HER-2基因状态,同时要排除是否为17号染色体单倍体,避免不必要的靶向治疗。本研究的创新之处1本实验把TMAG/NMA技术应用到普通石蜡包埋乳腺癌组织的IHC和FISH检测,拓展了乳腺癌检测条件。2.提出IHC++病例进行FISH检测,区分17号染色单倍体以免造成不必要靶向药物治疗。本研究存在的不足:本实验没能对全部病例进行长期随访,不能得出更多有意义的结论。