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瘤果黑种草(Nigella glandulifera Freyn)为毛茛科黑种草属植物,为中亚地区民间常用药物。具有利尿,止痛,解痉,通乳,治疗哮喘等作用。已有研究表明瘤果黑种草籽低极性组分中含有较强的蛋白酪氨酸磷酸酶(Protein Tyrosine Phosphatase1B,PTP1B)抑制成分,具有改善胰岛素抵抗活性,而其他部位的降糖活性成分尚未见研究报道。
为了寻找瘤果黑种草籽中有效的降糖成分,我们以PTP1B-321抑制活性为指标,对瘤果黑种草籽不同提取方法得到低极性部位、皂苷以及生物碱进行了跟踪研究。结果表明:PTP1B-321抑制活性由强至弱依次为石油醚热回流提取部位,生物碱,皂苷;低极性部位石油醚热回流提取为最佳提取方法,GC-MS分析结果表明其主要成分为不饱和脂肪酸。由于油脂部位研究较多,因此我们将研究重点放在生物碱上。
我们率先利用pH-区带精制逆流色谱法对瘤果黑种草籽中复杂的粗生物碱进行了分析分离。从中分离得到新骨架生物碱化合物5个,并利用1D-NMR,2D-NMR以及HRESI(+)MS对这些化合物进行了结构表征。这5个新生物碱分别是:NigelladineA(1), Nigelladine B(2), Nigelladine C(3), Nigellaquinomine(4), Nigellisoquinomine(5)。
通过对pH-区带精制逆流色谱法分离结果的分析,我们率先提出了有效分配时限(TL)这一概念,对洗脱区带随上样量增加而变宽进行了合理的解释,并对TL的固有性质进行了阐述。
通过对这5个生物碱化合物对PTP1B-321,人类醛糖还原酶(human AldoseReductase,hAR)抑制活性以及清除ABTS自由基活性的筛选,发现这些生物碱仅对PTP1B-321有强的抑制活性,其抑制活性与阳性对照药PTP1B-inhibitor(3-(3,5-Dibromo-4-hydrxy-benzoyl)-2-ethyl-benzOfuran-6-sulfnicacid-(4-(thiazol-2-ylsulfamyl)-phenyl)-amide)的几乎相当。并通过磺酰罗丹明B(sulforhodamine B,SRB)蛋白染色法对皮肤鳞癌细胞A431增殖抑制活性进行考察,发现这几个生物碱均无抑制A431细胞增殖活性,表明这些生物碱化合物均没有A431细胞毒性,具有成为降糖候选药物先导化合物的潜力。