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本文对粉纹夜蛾离体细胞诱导抗菌肽基因的cDNA克隆与序列分析进行了研究。主要内容如下:
(1)581细胞经灭活的Ecoli诱导后所产生的诱导产物有一定的抑菌活性。
(2)Tricine SDS-PAGE分析了581细胞诱导样品比对照样品多出1条较为明显的蛋白带,分子量在8KD左右。
(3)差异带N端10个氨基酸序列为A-V-N-V-E-T(A)-I(D)-A-A-V。
(4)将3’RACE克隆得到的目的基因测序,并推断其氨基酸序列及分子量。该cDNA序列全长为430bp,其中包括216bp(不完整)开放阅读框,推测编码72个氨基酸的多肽,分子量约为7490KD,等电点pI为4.17,同时含有214bp的3’非转译区。其N末端10个氨基酸序列与Edman降解法所得的氨基酸序列完全一致,分子量也与Tiscine SDS-PAGE显示的差异条带分子量接近。因此,初步判断其为抗菌肽基因。
(5)将所得基因及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析,结果显示该基因与核糖体基因有较高的同源性,而与已报道的抗菌肽基因基本没有同源性。