【摘 要】
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该研究采用SD大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,研究了全脑缺血对nNOS的丝氨酸磷酸化;CaMK Ⅱ α,PSD95和nNOS三者之间的相互作用的影响;同时研究了CaMK Ⅱ特异性的抑制剂、PSD95
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该研究采用SD大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,研究了全脑缺血对nNOS的丝氨酸磷酸化;CaMK Ⅱ α,PSD95和nNOS三者之间的相互作用的影响;同时研究了CaMK Ⅱ特异性的抑制剂、PSD95反义寡核苷酸等对其影响;进一步阐明了全脑缺血CaMK Ⅱ-PSD95-nNOS信号通路激活和调控的分子机制.1.脑缺血及CaMK Ⅱ特异性的抑制剂KN62对nNOS丝氨酸磷酸化和nNOS分布的影响采用SD大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,以免疫印记和免疫沉淀的方法研究了脑缺血海马中的nNOS的丝磷酸化及分布.2.脑缺血及CaMK Ⅱ特异性的抑制剂KN62对nNOS与CaMK Ⅱ α或p-CaMK Ⅱ α相互作用的影响为了进一步阐明脑缺血诱导细胞粗膜上nNOS丝氨酸磷酸化的机制,我们研究了nNOS与CaMK Ⅱα或p-CaMK Ⅱ α的相互作用及KN62对其的影响.3.脑缺血过程中PSD95介导了CaMK Ⅱ α催化nNOS丝氨酸磷酸化;PSD95通过PDZ-PDZ相互作用与nNOS相连接,而且可以直接促进内源性CaMKⅡ α催化nNOS丝氨酸磷酸化.为了研究PSD95是否和脑缺血诱导的CaMKⅡα催化nNOS丝氨酸磷酸化有关,我们用免疫共沉淀的方法研究了在缺血中CaMK Ⅱ α,PSD95和nNOS的相互作用及抑制PSD95的表达对其和nNOS丝氨酸磷酸化的影响.PSD95和nNOS及PSD95和CaMK Ⅱ α的相互作用在脑缺血后都增强;用PSD95反义寡核苷酸抑制PSD95的表达后,nNOS丝氨酸磷酸化水平被抑制,而且PSD95和nNOS及PSD9 5和CaMK Ⅱα,CaMK Ⅱα和nNOS的相互作用也被抑制.结果提示:在脑缺血过程中PSD95介导了CaMK Ⅱ α催化nNOS丝氨酸磷酸化.结论:全脑缺血能引起nNOS快速丝氨酸磷酸化,其机制是PSD95介导了在脑缺血后自身磷酸化并活化后的CaMK Ⅱ α催化nNOS快速丝氨酸磷酸化.在缺血后的大脑中,PSD95通过促进CaMK Ⅱ α催化nNOS快速丝氨酸磷酸化来改变nNOS的活性从而可能在脑缺血早期起着重要的保护作用.
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