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目的:观察继发性泡球蚴整鼠经液氮冻存后传代健康小鼠,被接种小鼠体内泡球蚴的生长情况及其生物活性,以探讨泡球蚴保种传代的新方法。
方法:从继发性泡球蚴小鼠腹腔中取出透亮泡球蚴的包囊组织,先吸出囊液3ml,包囊用无菌眼科剪剪碎,无菌纱网过滤除去不均匀组织块后与囊液混合,以青霉素及链霉素溶液混合稀释,使最终形成25%泡球蚴组织混悬液。青霉素浓度为800U/ml,链霉素浓度为500U/ml。最后加入地塞米松3滴。选取健康小鼠25只,消毒后腹腔注射0.5ml/只,作为本次研究对照组。另取继发性泡球蚴小鼠处死后密封并置液氮罐液相中冻存一周后取出,迅速解冻,自小鼠腹腔取出泡球蚴包囊组织,按前述方法配制悬液并接种健康小鼠20只,作为本次研究试验组。两组小鼠分别饲养两个月后处死,剖检并从以下方面评价冻存效果:(1)大体观察及泡球蚴包囊湿重的测量;(2)普通光学显微镜及电子显微镜观察组织学结构及超微结构;(3)从免疫学方面检测包囊囊液中的蛋白含量及血清中免疫球蛋白的含量;(4)检测小鼠血清碱性磷酸酶及囊液中钙离子含量等生化指标;(5)免疫组织化学观察IL-2Rα在泡球蚴组织中的有无及其分布情况。综合以上各方面,比较两组小鼠所接种泡球蚴有无差异。
结果:生长两个月后剖检,发现液氮低温冻存后泡球蚴所接种试验组小鼠与常规接种组小鼠均成功感染泡球蚴。模型对照组小鼠泡球蚴包囊湿重为1.6013±0.8819g,试验组小鼠泡球蚴包囊湿重为1.2000±0.7391g,两组间包囊湿重比较发现结果无显著性差异(P>0.05);病理组织及超微结构观察和处理发现模型对照组与试验组泡球蚴囊壁组织和细胞结构均正常且无明显差异;两组小鼠泡球蚴囊液中蛋白总量分别为模型对照组1.2489±0.5085g/L,试验组为1.2365±0.2730g/L,两组相比差异无显著性(P>0.05);两组小鼠血清中抗泡球蚴特异性免疫球蛋白测定结果表明其含量的差异无显著性(P>0.05),且其阳性率经比较亦无显著性差异(P>0.05);囊液中钙离子含量比较差异无显著性(P>0.05);两组血清碱性磷酸酶测定发现,模型对照组为6.6183±1.7402金氏单位/dL,试验组为6.4592±1.3511金氏单位/dL,两组相比无显著差异(P>0.05)。泡球蚴组织中IL-2Rα的表达在两组间无明显差异,均位于包囊囊壁生发层、生发囊囊壁及原头节内部分细胞。
结论:常规泡球蚴保种方法可被液氮冻存所替代。液氮冻存后泡球蚴仍具有感染小鼠的能力,且接种后所生长泡球蚴组织与常规接种泡球蚴组织生物活性无显著差异。