糖苷水解酶在生物体以碳水化合物为基础的新陈代谢过程中发挥着重要作用,就目前已知有2500多种。自然界发现的糖苷水解酶通常都存在一些不足,如表达量少、稳定性不强、底物特异性差、催化能力弱等,这些与人类生产使用的需求相悖,因此对其进行有效改造显得尤为迫切。本论文围绕两种糖苷水解酶的异源表达及酶学特性展开研究,分别为内切β-1,4-葡聚糖酶(EC3.2.1.4)和内切菊粉酶(EC3.2.1.7)。内切β-1,4-葡聚糖酶Cel12A(又称EG3)属于糖苷水解酶GH12家族,其能够对纤维素骨架中的β-1,4糖苷键随机水解,产生纤维素低聚糖。本论文中选取了草酸青霉 1 14-2(Penicillium oxalicum 114-2)、里氏木霉 QM6a(Trchodderma reesei QM6a)、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)来源的cel12A基因,使用毕赤酵母蛋白表达体系,对Cel12A蛋白异源表达成功。将表达成功的三种Cel12A蛋白,与里氏木霉发酵所得的Tlx1发酵液进行复配,以Avicel、DCCR、CCR为底物进行糖化实验,以分析Cel12A对高浓度底物的降解情况。分析发现Tlx1酶液中复配Cel12A蛋白,可以在一定程度上促进高浓度底物的降解,对后续Cel12A蛋白的应用有一定的指导意义,但仍需对其最优添加量及糖化条件进行优化。内切型菊粉酶是糖苷水解酶GH32家族中的一种酶,可以将菊芋中的菊粉催化水解为果糖或低聚果糖。由于低聚果糖具有多种保健功能,因此本实验选取黑曲霉(Aspergillus niger)来源的内切型菊粉酶基因,将其重组于里氏木霉T1ΔligD基因组中获得转化株。将转化株进行摇瓶产酶,获取酶液后以菊粉为底物进行糖化实验。实验发现,菊粉酶酶活与糖化效果不理想,分析可能由于本实验中,未将菊粉酶进行纯化,直接以改造株酶液进行糖化,酶液成分过于复杂,里氏木霉中本身所表达酶类阻碍了菊粉酶对菊粉的降解,也可能由于CBH Ⅱ为诱导型启动子,虽然菊粉酶有所表达,但表达量有限,进而导致糖化结果不理想,后续需要对转化株做进一步改造。