论文部分内容阅读
目的:探索CA12的表达与乳腺癌紫杉醇耐药细胞的相关性;并观察CA12-siRNA对乳腺癌细胞凋亡以及紫杉醇敏感性的影响,试图为紫杉醇耐药乳腺癌细胞的治疗提供新的策略。方法:体外培养正常乳腺细胞(MCF-10)、乳腺癌细胞(MCF-7)及乳腺癌紫杉醇耐药细胞(MCF-7TaxR),并将后两者各自分为三组:实验组(CA12-siRNA)、阴性对照组(Scramble-siRNA)以及空白对照组(DMSO)1、western blot 的方法检测 CA12-siRNA 转染前后 MCF-10、MCF-7 及 MCF-7 TaxR中CA12的表达2、MTT法检测MCF-7 TaxR在CA12-siRNA转染前后紫杉醇的敏感性。3、相差显微镜及经Hoechst 33342染色后,荧光倒置相差显微镜以及流式细胞仪检测单纯转染siRNA及siRNA联合紫杉醇两种处理方法下,MCF-7及MCF-7 TaxR各组细胞凋亡情况。4、western blot检测经线粒体途径介导的凋亡相关蛋白表达量。结果:1、相较于MCF-10组,CA12在MCF-7以及MCF-7 TaxR组中高表达,组间两两比较结果具有统计学差异。2、经携带CA12的siRNA转染后,CA12在MCF-7以及MCF-7 TaxR实验组中表达量下降,相较于两对照组(空白+阴性)结果有统计学意义(P<0.01)。3、CA12-siRNA转染细胞与紫杉醇共同培养48小时,MCF-7 TaxR的实验组较两对照组(空白+阴性)紫杉醇敏感性降低,结果具有统计学意义(P<0.05)。4、CA12-siRNA转染细胞与紫杉醇共同培养48小时,实验组较两对照组(空白+阴性)细胞凋亡数增多,结果具有统计学意义(P<0.05)。5、CA12-siRNA转染细胞与紫杉醇培养48小时,用western blot的方法检测线粒体通路相关蛋白的表达,MCF-7 TaxR细胞的结果显示实验组与两对照组(空白+阴性)相比,抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl的表达量明显下调,而促凋亡蛋白Bax、Bid的表达明显增加,同时下游效应分子caspase-9、caspase-7和PARP的活化蛋白Cleavedcaspase-7、Cleavedcaspase-9、CleavedPARP 表达也明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CA12在乳腺癌细胞MCF-7及乳腺癌紫杉醇耐药细胞MCF-7 TaxR中高表达,表明CA12的表达与乳腺癌相关,且与耐药相关。其表达可以被CA12-siRNA特异性敲低。CA12的沉默联合紫杉醇可以经激活线粒体细胞凋亡通路,促使MCF-7 TaxR细胞凋亡,增加乳腺癌紫杉醇耐药细胞对于紫杉醇的敏感性。