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目的:许多研究者认为Nanog基因是一种癌基因,促进肿瘤的发生、发展,因此我们将研究Nanog基因在诊断急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的价值,以及在患者标本中的表达水平及与患者的临床预后的关系。此外,除研究癌基因与AML关系外,是否存在一种抑癌基因,可以抑制肿瘤的进展而影响患者的总体预后,Foxo3基因被大多数研究者认为是长寿基因、抑癌基因,因此我们研究了Foxo3及其环状RNA(circ-Foxo3)对AML的诊断价值,并通过检测它们在AML中的表达、分析两者的相关性,从而研究两者对AML患者生存预后的影响。方法:一、我们收集了大量AML患者的骨髓标本,使用Ficoll分离出AML患者和健康供体的单个核细胞,用Trizol试剂从单个核细胞中分离总RNA,使用随机引物将总RNA逆转录成c DNA。利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)检测了Nanog在146例初诊AML样本、31例健康对照样本;使用感受性曲线(ROC)来判断Nanog对AML的诊断价值,并以此区分急性髓细胞性白血病患者与健康对照者。通过Kaplan-Meier生存分析研究Nanog对AML病人的生存预后的影响。二、同样的方法检测了Foxo3在122例初诊AML样本、30例健康对照样本以及五种细胞株中的表达;检测了circ-Foxo3在117例初诊AML样本、24例健康对照样本及五种细胞株中的表达;利用上述同样的方法检测了Foxo3及其circ-Foxo3在初诊AML患者中的表达,此外利用Pearson相关分析研究Foxo3和circ-Foxo3表达之间的相关性。结果:因检测Nanog、Foxo3和circ-Foxo3具有时间先后性,且标本库内的标本数量处于动态波动中,因此检测每一种基因或环状RNA时的标本量均不相同。以下分别为两组研究结果:一、146例AML患者Nanog基因表达水平呈明显上调趋势,与31例健康人对照组相比,有明显的统计学差异(P=0.01);Nanog高、低表达组与初诊AML患者的性别、年龄、白细胞计数、血红蛋白、血小板计数、骨髓原始细胞比例、FAB分型上无显著性差异,与多种基因突变也无明显差异,高表达Nanog主要出现在非低危患者组(P=0.027)。通过ROC曲线分析可知,Nanog对AML患者具有诊断价值,其ROC曲线下面积为0.644(95%置信区间:0.556~0.731;P=0.012),敏感性和特异性分别为46.9%和87.1%,以截止值0.324将AML患者分为高表达组及低表达组。经COX多因素分析后,Nanog低表达及白细胞计数是影响AML患者预后的独立危险因素。实验组患者的总中位随访时间约为7个月,高表达组的生存时间趋势较低表达组长(P=0.484)。非M3患者中,低表达组患者的生存时间较高表达组患者趋势短(P=0.126);在非低危组患者中,Nanog高表达组患者生存时间明显比低表达组患者生存时间长(P=0.031)。二、(1)122例AML患者中Foxo3表达水平呈明显上调趋势,与30例健康人对照组相比(P<0.01);高、低表达组在患者的性别、年龄、白细胞计数、血红蛋白量、血小板计数、原始细胞比例、染色体分型中的差异无统计学意义,在WHO分型及七种常见的基因突变中也无统计学差异。通过ROC曲线分析可知,Foxo3对AML患者具有诊断价值,其ROC曲线下面积为0.655(95%置信区间:0.556~0.753;P=0.009),敏感性和特异性分别为44.7%和87.7%,以截止值0.856将AML患者分为高表达组及低表达组。经COX多因素分析后,Foxo3低表达是影响AML患者预后的独立危险因素,染色体危险度分型和年龄为影响AML患者预后的独立危险因素。实验组患者的总中位随访时间约为10个月,高表达组的生存时间趋势长于低表达组(P=0.192)。非M3组、非低危组及染色体正常组,高表达Foxo3的患者生存时间长于低表达患者,P值分别为0.002、0.004、0.034,差异具有统计学意义。(2)117例AML患者中circ-Foxo3表达与24例健康人相比呈低表达水平(P=0.04),高、低表达组在患者的性别、年龄、白细胞计数、血红蛋白量、血小板计数、原始细胞比例、染色体分型中的差异无统计学意义,在WHO分型及七种常见的基因突变中也无统计学差异。通过ROC曲线分析可知,Nanog对AML患者具有诊断价值,其ROC曲线下面积为0.633(95%置信区间:0.523~0.742;P=0.041),敏感性和特异性分别为62.1%和75%,以截止值0.233将AML患者分为高表达组及低表达组。COX多因素分析显示circ-Foxo3、白细胞计数、血红蛋白量,原始细胞比例、染色体分型等指标均对患者预后无明显影响。实验组患者的总中位随访时间约为8个月,circ-Foxo3高、低表达组患者的生存时间和无病生存时间在各分型(FAB分型、WHO分型、染色体分型)中均无明显统计学差异。(3)我们对Foxo3和circ-Foxo3的表在细胞株Pearson相关分析,结果表明:Foxo3和circ-Foxo3在细胞株中的表达呈明显的正相关趋势(相关系数R=0.98,P<0.0021);Foxo3和circ-Foxo3在AML患者中的表达两者呈同样呈正相关趋势(相关系数R=0.63,P<0.0001)。结论:一、Nanog过表达是AML中的常见分子事件,与非低危组AML患者有明显关系,可能是判断AML预后的新的生物学标志物。二、circ-Foxo3与Foxo3基因的低表达是AML中的一种常见分子事件,是影响AML患者生存预后不良的重要因素。