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目的:云芝糖肽(Polysaccharopeptide of Trametes versicolor,PSP)是从云芝Cov-1菌株深层发酵菌丝体中提取得到的一种高分子量结合蛋白多糖,临床用于提高机体免疫功能、拮抗放、化疗的毒副作用并抑制肿瘤。本研究探讨了肠上皮细胞对PSP的跨层转运能力,及转运后的PSP对树突状细胞的激活作用。方法:PSP首先用酪胺法标记了FITC。肠上皮层模型采用在Transwell小室中培养Caco-2细胞获得,M细胞模型在Caco-2培养后培养池下层加入Raji共培养后获得。跨上皮层的转运分析通过在小室内加入PSP-FITC,然后在0-16hr小时在下室取样用荧光分光光度仪检测跨细胞层后的PSP-FITC荧光强度。进入Caco-2和M细胞内的PSP还用荧光显微镜进行了观察。PSP在小肠内的吸收采取小鼠离体小肠灌注方法进行,进入肠壁内的PSP-FITC用荧光显微镜法观察冰冻切片进行,肠腔内的PSP降解情况用HPLC法进行了分析。PSP诱导肠细胞和树突状细胞产生TNF-α,IL-8、IL-12等细胞因子的活性用ELISA法进行了检测,小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)采用GM-CSF,IL-4诱导骨髓细胞获得,PSP调控MHC-II,CD80,CD86的作用用流式细胞仪进行了分析。结果:PSP用酪氨法标记FITC后,显示出与FITC相同的荧光光谱,能用于巨噬细胞荧光染色。加入小室4h后,下室中出现PSP-FITC的荧光且强度随时间延长而增加。这种现象在Caco-2/Raji双培养模型中更为显著,16h时PSP-FITC荧光强度比Caco-2组高26.26%。荧光显微镜观察PSP-FITC进入了Caco-2和M细胞。灌注小肠2小时后,PSP-FITC出现在肠上皮和基底层内,同时还出现在肠绒毛中心的乳糜管的位置。HPLC结果显示PSP在肠内保留了高分子的状态。PSP能显著促进树突状细胞分泌细胞因子TNF-α和IL-12,100μg/m L时诱导的生成量分别是对照的1.96和1.85倍,还促进BMDC细胞表达MHC-II,CD80和CD86,提高幅度分别为6.5%、7.1%和5.0%。经过转运后含有PSP的细胞培养液也能够显著升高DC表达MHC-II,CD80和CD86,提高幅度分别为11.1%,16.8%,27.6%,但对Caco-2和M细胞无细胞因子TNF-α和IL-8的诱生作用。总结:综上所述,高分子PSP可被肠上皮细胞吸收并跨层转运从而进入肠壁,到达乳糜管。M细胞加强了PSP的肠道吸收。PSP不直接刺激肠上皮细胞产生细胞因子,但能激活BMDC。被转运后的PSP仍旧具有DC激活活性。因此PSP的免疫调节机制在通过肠道转运吸收后继而激活树突状细胞,从而起始整体的宿主免疫反应。