论文部分内容阅读
目的前列腺癌（prostate cancer，PCa）是男性最常见的恶性肿瘤之一，远处转移是前列腺癌患者死亡的最主要原因，前列腺癌容易发生远处转移的确切机制目前尚不清楚。大量的研究发现前列腺癌中B7-H3的表达与肿瘤转移有密切的关系。B7-H3是由Chapoval等人发现的B7协同共刺激分子（costimulatory molecule）家族成员之一。后来，有研究发现B7-H3可以介导细胞与细胞之间以及细胞与细胞外基质蛋白之间的粘附，B7-H3粘附功能的发现为解释该分子在肿瘤侵袭、转移中的作用提供了新的线索。本研究旨在初步探索B7-H3在前列腺癌骨转移中的作用，为研究B7-H3在肿瘤转移中的机制奠定基础。方法实验共分为三部分：(1)利用B7-H3过表达载体转染前列腺癌LNCap细胞，得到稳定过表达B7-H3的前列腺癌细胞B7-H3/LNCap，并通过实时定量PCR（real-time PCR）、逆转录PCR（reverse transcription PCR, RT-PCR）及流式细胞技术（flow cytometry，FCM）对该转染细胞进行鉴定。(2)前列腺癌转染前、后体外生物学功能的检测，包括：基质-细胞粘附实验检测细胞粘附能力；划痕实验检测细胞水平迁移能力；Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力；凋亡实验检测细胞对不良环境的抵抗力；酶联免疫吸附法（enzyme-linkedimmunosorbent assay， ELISA）检测细胞上清中基质金属蛋白酶9（matrixmetalloproteinase9, MMP-9）的分泌情况。(3)对部分前列腺癌患者的组织标本进行了B7-H3的免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）；并进行了转染前、后的动物模型实验。结果（1）转染后的前列腺癌细胞株B7-H3/LNCap通过real-time PCR、RT-PCR及FCM的鉴定，从mRNA和蛋白质水平上均发现B7-H3的表达量显著高于未转染组LNCap。（2）通过比较转染前、后两组细胞的相关实验结果显示，B7-H3/LNCap组细胞的粘附能力、迁移能力、侵袭能力和抗凋亡的能力显著高于未转染组LNCap，过表达组细胞上清中MMP-9的含量也显著高于未转染组。（3）临床组织标本的免疫组化结果显示，前列腺癌组织中B7-H3的表达显著高于正常组。在动物模型中，B7-H3/LNCap组的肿瘤明显大于LNCap组。结论成功构建了过表达B7-H3的前列腺癌细胞株B7-H3/LNCap；B7-H3分子的过表达提高了前列腺癌细胞的粘附能力、迁移能力、侵袭能力以及抗凋亡的能力，而且促进了细胞对MMP-9的分泌；B7-H3在前列腺癌组织中相对于正常组织异常高表达，B7-H3具有抑制肿瘤免疫，促进肿瘤发生的作用。