β-葡聚糖是自然合成的多聚糖,属植物细胞壁中的结构性非淀粉多糖,是以右旋葡萄糖为基本单位,具有线型的空间结构,存在于禾谷类中的糊粉层和胚乳细胞中。β-葡聚糖的结构中含有β-1,3和β-1,4两种糖苷键,前者的存在导致了纤维素分子的不规则排序,使得这些物质在生理、化学特性、水溶性方面都有一定的差异。在低浓度时,β-葡聚糖与水分子相互作用增加了溶液的粘度,随着其浓度的增加,则β-葡聚糖分子本身缠成网状结构,引起溶液粘度大大增加,当达到一定程度时可能形成凝胶。β-葡聚糖酶对β-葡聚糖具有重要的水解作用,能使其降解为低分子量片段,失去亲水性和粘性。因此β-葡聚糖酶在食品工业,如制糖工业;发酵工业,如啤酒糖化、啤酒麦芽汁生产等;以及饲料工业中到得到了广泛的应用。但是在应用和流通流域存在很大问题:酶活力单位不一致。由于目前广泛采用的测定β-葡聚糖酶活力的方法是DNS(3,5-二硝基水杨酸)法,该方法灵敏度较低,在很多的应用领域用该方法都测不出酶活力;底物要求很高,一般浓度都在1%,造成成本较高,也测不出初速度,并且该方法产生的寡糖摩尔吸光系数不一致,造成酶浓度曲线不成线性。本论文所采用的MBTH(苯丙噻唑酮腙)法不但灵敏度高,底物浓度要求低,而且能进行微量测定,因此将会在饲料、食品、医药、纺织、植物病害防治等领域得到广泛的应用。本论文主要包括以下研究内容:1.建立MBTH法测定β-葡聚糖酶活力的新方法首先对β-葡聚糖底物的配制进行研究;然后研究底物对酶催化反应的影响;最后确定了酶催化反应的参数。结果表明:该方法测得的Km值较小,即本实验该试验所用的β-葡聚糖酶和β-葡聚糖亲和力较大,酶活力测定更准确可靠,且可大幅度降低底物浓度,从而节约测定成本;另外MBTH法回收率较好,精密度和灵敏度较高,不存在还原剂的干扰,而且能用于微量酶活力测定。2.对MBTH法、DNS法和S-N法在β-葡聚糖酶活力方面进行比较研究分别用MBTH法、DNS法、S-N(Somogyi-Nelson)法测定β-葡聚糖酶的酶动力学曲线;然后从检测限、定量限、回收率及精密度等方面对这三种方法进行比较,结果表明:S-N法操作繁琐、灵敏度较低,DNS法无法测定酶解初速度,且都不能进行微量酶活力测定,MBTH法弥补了上述两种方法的不足,且节约成本,因此将会得到广泛的应用。3.MBTH法在基质中酶活力测定中的应用研究MBTH法测定基质中β-葡聚糖酶活力。该基质来源于饲料、海参体壁提取液等。饲料溶液的提取:溶解、磁力搅拌、离心等。海参体壁提取液的提取:匀浆、缓冲液浸提、盐析、透析等。4.高通量分析法测定β-葡聚糖酶活力首先用MBTH法与微孔板测定手段相结合的分析法测定还原糖标准曲线;然后建立β-葡聚糖酶浓度标准曲线;最后将其应用于饲料中的酶活力测定。结果表明:微孔板法较试管法灵敏度稍低,但酶浓度对反应速度的曲线的斜率和试管法基本一致;且该方法在饲料酶活力测定中检测限和定量限较低,能进行微量酶活力测定;该方法一次能处理大量的样品,且所需试剂量较少,在实现高通量分析的同时,大幅度降低了测定成本。