【摘 要】
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目的:探究TUG1作为Lnc RNA调控miR-627及其靶基因IGFR1的表达从而参与增生性瘢痕的发生发展的机制,为Lnc RNA治疗增生性瘢痕提供新的思路和理论依据。研究方法:收集2021年5月到2021年10月于北部战区总医院和平院区整形外科接受手术治疗的30例患者的增生性瘢痕（hypertrophic scar,HS）组织及减张缝合需要切除的邻近的正常皮肤组织。提取样本组织的RNA后送检,
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目的:探究TUG1作为Lnc RNA调控miR-627及其靶基因IGFR1的表达从而参与增生性瘢痕的发生发展的机制,为Lnc RNA治疗增生性瘢痕提供新的思路和理论依据。研究方法:收集2021年5月到2021年10月于北部战区总医院和平院区整形外科接受手术治疗的30例患者的增生性瘢痕（hypertrophic scar,HS）组织及减张缝合需要切除的邻近的正常皮肤组织。提取样本组织的RNA后送检,利用基因生物芯片技术对Lnc RNA在HS和邻近的正常皮肤组织中的表达情况进行检测,选取差异性表达最明显的TUG1为研究对象,并用逆转录定量聚合酶链反应（Real Time PCR）验证其差异性表达。应用Target Scan数据库检索与TUG1有潜在结合位点的miRNA,选取miR-627作为TUG1的靶miRNA,并用Real Time PCR验证其差异性表达。统计分析TUG1与miR-627的表达相关性,并用荧光素酶报告基因实验印证二者相关性。应用Target Scan数据库检索与miR-627有潜在结合位点的蛋白,选取IGFR1作为miR-627的靶蛋白,应用Real Time PCR验证其差异性表达。绘制TUG1与IGFR1的表达含量图,验证TUG1与IGFR1的作用关系;绘制IGFR1与miR-627的表达含量图,应用荧光素酶报告基因实验印证IGFR1与miR-627的相关性。通过Real Time PCR和Western Blot实验检测成纤维细胞中miR-627和IGFR1的表达水平及TUG1对其二者表达的影响。应用MTT实验、Transwell实验探究TUG1对增生性瘢痕组织成纤维细胞的影响。应用Real Time PCR、MTT、Transwell及Western Blot实验观察control+scramble（对照组）、control+TUG1、miR-627+scramble及miR-627+TUG1四种不同转染因素对成纤维细胞的增殖速率、迁移能力及其中TUG1、miR-627和IGFR1表达的影响。通过构建兔耳瘢痕模型,应用HE染色,Masson染色、免疫组化、Western Blot及Real Time PCR实验,验证在动物体内TUG1作为Lnc RNA调控miR-627及其靶基因IGFR1的表达,从而参与HS发生发展的机制。结果:基因芯片检测结果显示,TUG1及其靶基因miR-627在增生性瘢痕组织中差异性表达最明显。TUG1与miR-627的表达含量图和荧光素酶报告基因实验证实,TUG1可与miR-627相结合,并可以调节miR-627的活性。Target Scan数据库检索出IGFR1是miR-627的靶蛋白。TUG1与IGFR1的表达含量图显示,TUG1可以调控IGFR1,且两者呈正相关。IGFR1与miR-627的表达含量图及荧光素酶报告基因实验证实,IGFR1可与miR-627结合,且两者呈负相关。Real Time PCR和Western Blot实验检测发现TUG1可以下调成纤维细胞中miR-627的表达,上调IGFR1的表达。Real Time PCR、Western Blot、MTT及Transwell实验结果显示,TUG1上调后,miR-627下调,IGFR1上调,成纤维细胞增殖速率及迁移能力上升;而TUG1下调后,miR-627上调,IGFR1下调,成纤维细胞增殖速率及迁移能力下降。在兔耳瘢痕模型实验中,HE染色和Masson染色结果显示,上调TUG1的组织真皮层增厚,毛细血管扩张,胶原纤维呈大的粗的不规则状,繁密且方向紊乱,FBS增殖数量巨大。而上调miR-627组真皮层较薄,平整无突出,胶原纤维呈小的细的规则状,密度稀疏,排列方向规律,类似于正常皮肤组织。免疫组化结果显示,TUG1能上调增生性瘢痕组织中IGFR1的表达,而miR-627使IGFR1的表达下调。最后Western Blot实验和real time PCR结果显示,control+TUG1组IGFR1的表达水平上升,而miR-627+scramble组的IGFR1表达水平降低。结论:1、Lnc RNA TUG1在增生性瘢痕和邻近的正常皮肤组织中存在差异性表达,且TUG1在增生性瘢痕中的表达显著上调。2、miR-627在增生性瘢痕组织中的表达下调,TUG1可以通过下调miR-627来促进增生性瘢痕的发生发展。3、IGFR1在增生性瘢痕组织中的表达上调,miR-627可以通过抑制IGFR1的表达进而抑制增生性瘢痕的发生发展。4、TUG1作为Lnc RNA通过抑制miR-627来促进其靶基因IGFR1的表达,从而促进增生性瘢痕的发生发展。
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