【摘 要】
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紫花山柰,学名Kaempferia elegans(Wall.)Bak.,姜科山柰属植物,也是广东省的特色植物,目前国内外研究主要在其化学物质的分离和体外活性探究方面,而紫花山柰根茎中多糖的提取率不高,结构特征研究较少,活性及作用机理尚不明确。本论文旨在对紫花山柰根茎中多糖进行系统性研究,从紫花山柰多糖的提取入手,对热水提取法和脉冲电场辅助热水提取法进行单因素分析和响应面优化,对比两种方式的提取率
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紫花山柰,学名Kaempferia elegans(Wall.)Bak.,姜科山柰属植物,也是广东省的特色植物,目前国内外研究主要在其化学物质的分离和体外活性探究方面,而紫花山柰根茎中多糖的提取率不高,结构特征研究较少,活性及作用机理尚不明确。本论文旨在对紫花山柰根茎中多糖进行系统性研究,从紫花山柰多糖的提取入手,对热水提取法和脉冲电场辅助热水提取法进行单因素分析和响应面优化,对比两种方式的提取率,以确定最佳提取工艺,并分析脉冲电场预处理对原料的影响;其次,对采用最佳提取工艺提取的紫花山柰多糖进行初步纯化,分析和鉴定紫花山柰粗多糖的化学成分、分子量和单糖组分,利用紫外光谱、红外光谱和扫描电镜对多糖结构进一步分析和验证;另外,探究紫花山柰粗多糖的体外抗氧化活性和体外降血糖活性;最后,通过动物实验,研究紫花山柰粗多糖对小鼠糖尿病的干预效果和潜在的降血糖机理。主要研究结果如下:(1)紫花山柰多糖的提取工艺优化。热水提取法是提取植物多糖的传统方法,利用响应面法优化后,紫花山柰多糖的提取最佳条件是:提取温度为100℃、提取时间为2.7h、料液比为1:18,最终多糖提取率为264 mg/g;而采用脉冲电场预处理并进行响应面优化后,在电场强度为31 k V/cm、脉冲数为64、提取温度为98℃、提取时间为2.5 h、料液比1:18的最优条件下,多糖提取率增大到405 mg/g,提升了1.53倍,表明脉冲电场预处理能够明显提高多糖提取率。脉冲电场预处理提高了多糖提取率的原因可能是电场作用使原本紧致的组织变得松散,有助于溶剂的扩散,且由于电穿孔作用提高了细胞膜的通透性,有利于与溶剂的充分结合,从而增强传质过程,提高多糖提取率。(2)紫花山柰粗多糖的成分鉴定分析。采用脉冲电场辅助热水提取法的最佳工艺对紫花山柰多糖进行提取,并通过醇沉和脱蛋白操作来初步纯化。纯化后的紫花山柰粗多糖主要成分是:多糖887.73±8.73 mg/g、蛋白质4.95±1.10 mg/g、硫酸根27.86±0.91mg/g,糖醛酸75.54±11.08 mg/g、总多酚3.71±1.20 mg/g。紫花山柰粗多糖分子量较大,主要组分的分子量为1268 k Da和另一组分分子量为6 k Da;主要由葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖、岩藻糖6种单糖组成,其摩尔百分比分别为84.44%、6.52%、3.39%、2.27%、1.97%和1.41%。此外,红外光谱结果表明该多糖含有糖醛酸和α-吡喃糖苷,扫描电镜下其形态为球状颗粒堆积成片状。(3)紫花山柰粗多糖的体外活性研究。紫花山柰粗多糖的体外抗氧化实验结果表明:其具有一定的DPPH自由基清除能力和ABTS自由基清除能力,但对ABTS自由基敏感度不够,需要达到一定剂量才具有比较好的清除效果。而体外降血糖实验结果表明,紫花山柰粗多糖具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制能力,并呈剂量依赖效果,表明紫花山柰粗多糖具有改善糖尿病患者血糖的潜力。(4)紫花山柰粗多糖干预小鼠糖尿病的效果评价。通过STZ诱导建立糖尿病动物模型,并对糖尿病小鼠灌胃6周,研究结果表明,紫花山柰粗多糖能够改善空腹血糖值持续上升的情况,也能降低糖尿病小鼠的饮水量和饮食量,改善糖尿病的典型症状,且对体重没有副作用影响。另外,脏器指数表明,STZ诱导的糖尿病小鼠的肝、肾、胰腺都遭到了一定程度的损害,而紫花山柰粗多糖具有脏器修复的功效。(5)紫花山柰粗多糖改善血糖水平的潜在机制。通过对紫花山柰粗多糖灌胃干预小鼠糖尿病后,机体中血清和肝脏中相关指标测定,探究了紫花山柰粗多糖改善糖尿病小鼠血糖机理,主要是以下三个方面:(1)提高GCK和CP含量,降低G6Pase,改善糖代谢途径中关键酶的含量,从而促进糖酵解过程中血糖的消耗,抑制糖异生途径中内源性葡萄糖的产生和促进胰岛素产生,以此调控机体血糖水平;(2)通过降低TG、TCHO、LDL-c含量,升高HDL-c含量,调节血脂各项指标为正常水平,阻止高血脂水平恶化糖尿病病情;(3)发挥紫花山柰粗多糖良好的清除自由基能力和提高CAT、GAH-Px、T-SOD的活力,提升机体内部的抗氧化防御系统的能力,以此达到降血糖的效果。
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