VDAC在心肌细胞缺氧/复氧中的作用及机制研究

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目的:本实验拟以心肌细胞缺氧/复氧(anoxia-reoxygenation,A/R)为模型,探讨在心肌组织表达丰度最高的VDAC1在心肌急性损伤中的作用及机制,进一步探讨心肌细胞缺血再灌注损伤机制。   方法:以pSuper.Retro质粒为载体,构建shRNA VDAC1质粒。通过基因转染和RNA干扰技术,建立心肌细胞H9C2 VDAC1蛋白正常表达组与低表达组,Western blot法测定VDAC1的蛋白表达检测重组质粒的干扰效率。实验分四组,每组重复6次。①Control组;②A/R组;③pSuper+A/R组;④ps-VDAC1+A/R组。通过MTT法测定VDAC1各表达组心肌细胞存活率;利用流式细胞仪测定线粒体膜电位、细胞凋亡程度。   结果:转染质粒shRNA VDAC1的H9c2细胞VDAC1的蛋白表达比正常组低,表明重组质粒能下调H9c2细胞VDAC1蛋白表达。经缺氧复氧损伤,VDAC1正常表达组细胞凋亡明显比Control组严重,细胞存活率明显降低,线粒体膜电位丧失;而VDAC1蛋白低表达组能显著减轻细胞损伤,细胞存活率提高,保护线粒体膜电位(p<0.01)。pSuper+A/R组和A/R组无显著性差异(p>0.05)。   结论:VDAC1参与了缺氧复氧损伤,下调VDAC1蛋白表达可保护心肌细胞,抵抗A/R损伤。
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