本研究旨在通过对猪萨佩罗病毒（porcine sapelovirus,PSV）流行株的分离培养,了解其对仔猪的致病性及遗传进化特征;进一步以体外表达的PSV VP1重组蛋白为抗原,制备多克隆抗体,建立检测PSV Ig G抗体的间接ELISA方法,为深入了解PSV特性及为临床提供血清学诊断技术提供科学依据。1.PSV的分离鉴定、基因组测序及遗传进化分析利用PK-15细胞从仔猪腹泻粪便样品中分离到一株PSV,命名为SHCM2019。该分离株基因组全长为7,567 bp（Genbank登陆号:MN685785）。基于ORF片段的系统发育分析表明,SHCM2019与YC2011同源性最高,核苷酸相似度为90.8%,氨基酸相似度为98%,两者形成一单独分支,聚集在中国PSV毒株的集群上。该分离株可能为He B04与ISU-SHIC的重组株,在3D上游存在一个潜在重组断点。VP1蛋白氨基酸突变位点分析显示,VP1区域存在氨基酸突变现象。2.PSV SHCM2019毒株对仔猪的致病性研究选取6头5日龄PSV阴性仔猪,随机分为3组,每组2只,观察3 d后,实验1组与2组分别接种5 m L与15 m L 10^7.41TCID₅₀的SHCM2019,实验3组作为对照组接种DMEM。观察仔猪发病情况,每天采集肛拭子,利用q PCR检测粪便中的病毒载量,若有仔猪发病,则对发病仔猪组织进行病理学观察及核酸定量检测。结果显示,实验1组1头仔猪在接种后第5 d出现水样腹泻,实验2组1头仔猪在接种后第2 d出现水样腹泻,第6 d剖检所有仔猪,发现病变主要发生在仔猪肠道及肺部,病理表现为:肠管变薄,肠道内容物稀烂,肠绒毛萎缩及断裂,肠粘膜下层水肿;肺部肿胀,局部出血,肺泡间隔增厚且浆液渗出,炎性细胞浸润。PSV主要定植在肠道及肺部,脑部与肠淋巴中也有少量分布,但心、肝、肾中未检测到病毒核酸。感染PSV的动物可通过粪便排毒,且攻毒后3～6天粪便中病毒载量较高。3.PSV VP1蛋白的原核表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立将扩增的PSV VP1片段插入p ET28a质粒,利用原核系统,表达VP1蛋白。SDS-PAGE显示,重组蛋白分子量约40 k Da,以包涵体形式存在。将重组VP1蛋白纯化后免疫小鼠,制备鼠抗PSV多克隆抗体,ELISA证实其具有较高效价,Western blot证实其具有良好特异性,免疫荧光表明其具有良好反应原性。以VP1重组蛋白为抗原,建立检测PSV Ig G抗体的间接ELISA方法。该方法的最佳包被浓度为2?g/m L,最佳血清稀释度为1:400。该方法特异性较强,仅与PSV阳性血清呈特异性反应,批内和批间试验的变异系数均小于10%。