魏氏梭菌是一种梭状芽孢属条件性致病菌，该病广泛分布于自然界，是肠道中的常在菌群之一。在一定条件下，可引起机体严重的疾病。延边地区是魏氏梭菌病的高发区，尤其对延边黄牛的危害极为严重。而针对该病的检测尚无一套完整的血清学技术，因此，本研究将提取的D型魏氏梭菌制成菌体抗原，并建立了检测该病的间接ELISA方法。本实验对间接ELISA的反应条件进行了摸索，确定了最适工作条件。结果表明，美国Costar公司生产的酶标板的变异系数为4.5％，达到间接ELISA的要求；D型魏氏梭菌菌体裂解抗原最适包被浓度为50μg／ml，最适包被条件为37℃1h；被检血清的最适稀释度为1：100，酶标二抗的最适工作浓度为1：1000，血清与酶标二抗的反应时间均为37℃1h；最适封闭时间为37℃1h；PBST稀释液中脱脂乳的浓度为3％；底物最适反应条件为室温25min；阴阳性临界值为0.032。经特异性试验和重复性试验，表明建立的间接ELISA方法是特异的，且重复性好；对采集于延边地区的100份牛血清样品进行间接ELISA检测，结果阳性率为11％。本试验应用D型魏氏梭菌菌体裂解抗原为抗原，成功建立了一种检测延边黄牛血清中D型魏氏梭菌抗体的间接ELISA诊断方法，为延边黄牛D型魏氏梭菌疾病免疫监测和血清学调查提供了一种快捷、敏感、特异的血清学诊断方法。