论文部分内容阅读
奶牛乳腺炎是危害奶牛养殖业最大的疾病之一,它能带来严重的经济损失。乳腺上皮细胞是机体与外界直接接触的细胞,也是抵御病原菌的重要免疫细胞。褪黑素(MLT)是由松果体分泌的,有广泛的生理作用,更是一种有效的自由基清除剂和抗氧化剂。本研究以牛乳腺上皮细胞MAC-T为研究对象,通过脂多糖(LPS)诱导建立牛乳腺上皮细胞炎症模型,通过MTT法检测细胞活力,荧光定量PCR检测炎症因子信号变化,探究MLT对LPS诱导的牛乳腺上皮细胞炎症的抗损伤作用,为有效筛选治疗乳房炎药物提供理论依据。1.LPS对MAC-T细胞活力的影响,与时间和浓度有关。MTT结果表明,不同浓度的LPS作用MAC-T细胞12h时,细胞活力没有显著的变化,作用MAC-T细胞24h时,LPS的浓度为100μg/m L显著提高细胞活力,浓度400μg/m L的LPS显著抑制细胞活力,LPS作用细胞48h时,LPS的浓度为200μg/m L、250μg/m L、300μg/m L、400μg/m L显著抑制细胞活力,LPS作用细胞72h时,所有浓度的LPS均能抑制细胞活力。2.牛乳腺上皮细胞炎症模型的建立选择LPS浓度为(50、100、150、200、250)μg/m L的LPS处理细胞12h,用荧光定量PCR的方法检测炎症因子IL-6、IL-8的m RNA表达的表达水平,结果显示,所有浓度的LPS均能显著提高IL-6、IL-8的m RNA的表达水平,其中LPS的浓度为100μg/m L时,IL-6、IL-8的m RNA的表达水平最高,所以我们选择100μg/m L处理细胞12h时,作为建立牛乳腺炎模型的条件。3.MLT对LPS诱导的牛乳腺上皮细胞损伤的作用MTT法可知,MLT在浓度50μM/L、100μM/L、150μM/L、200μM/L时可提高MAC-T细胞活力,其中100μM/L、200μM/L可显著提高细胞活力。荧光定量PCR结果显示,50μM/L、100μM/L的能显著下调炎症因子IL-6、IL-8的表达,以及下调TLR4/NF-κB信号通路关键因子TLR4、NF-κBp50的表达。本实验研究结果表明,褪黑素可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路的活化,降低下游炎性因子IL-6、IL-8的表达起到抗炎作用,从而达到保护牛乳腺上皮细胞损伤的目的。