第一部分嗅鞘细胞的体外培养、纯化和鉴定目的进行嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells，OECs)的培养和纯化，观察其免疫荧光化学染色的表现，并计算OECs的培养纯度，为下一步试验打下基础。方法分离新生2天SD大鼠的嗅球，制成单细胞悬液，在含10％FBS的DMEM／F12培养液(FBS组)、含1％N2的DMEM／F12培养液(N2组)、含1％B27的DMEM／F12培养液(B27组)以及含1％N2和1％B27的DMEM／F12培养液(N2+B27组)中进行培养，观察OECs的生长状态。采用多次长时差速贴壁法和低浓度胰酶快速消化法对FBS组的OECs进行纯化并计算细胞纯度，用p75NTR和GFAP进行免疫细胞荧光化学染色，激光共聚焦显微镜观察其染色特点。结果OECs在N2组、B27组和N2+B27组的三种无血清培养条件下难以存活，在FBS组的有血清培养条件下生长良好，主要污染细胞是成纤维细胞。采用多次长时差速贴壁法和低浓度胰酶快速消化法可获得较高的细胞纯度，培养2周时细胞纯度为89.4±7.3％，OECs联合表达p75NTR(+)和GFAP(+)，p75NTR主要表达在胞体，GFAP在胞体和突起均有表达。结论目前OECs的体外培养仍为需血清培养，采用多次长时差速贴壁法和低浓度胰酶快速消化法可获得高纯度的OECs，本试验方法具有高度可重复性，为进一步研究OECs对螺旋神经节细胞的作用奠定基础。第二部分不同培养液对体外培养螺旋神经节细胞的影响目的研究不同培养液对体外培养螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells，SGCs)突起长度、细胞存活的影响，寻找更好的SGCs的培养方法。方法取新生2d的SD大鼠蜗轴螺旋管，进行消化分离，制成单细胞悬液，分别采用含10％FBS的DMEM／F12培养液(FBS组)、含1％N2的DMEM／F12培养液(N2组)、含1％B27的DMEM／F12培养液(B27组)以及含1％N2和1％B27的DMEM／F12培养液(N2+B27组)培养2周，Neurofilement抗体行免疫细胞荧光化学染色，鉴定SGCs，并观察不同培养条件下SGCs的突起长度、细胞数量的变化。结果FBS组和N2组在第5天达到最长突起长度，分别为111.24±28.61μm和113.15±17.70μn；N2+B27组和B27组在第7天达到最大值，分别为184.26±30.06μm和193.50±29.13μm。前二组间和后二组间无统计学差异(P＞0.05)，前二组与后二组间有非常显著的统计学差异(P＜0.01)。细胞数量均在第1天最多，四组培养液中SGCs的细胞数无统计学差异(P＞0.05)，之后呈下降趋势。在FBS组和N2组中，细胞数量下降明显，至第14天时，仅为7.07±2.55个／视野和4.34±2.63个／视野。而在N2+B27组和B27组中，细胞数量呈小幅减少，至14天时，仍可维持在115.60±16.33个／视野和117.8±15.52个／视野。四种培养液中，FBS组和N2组间的细胞数量无统计学差异(P＞0.05)，N2+B27组和B27组间也无统计学差异(P＞0.05)，但后二者与前二者之间自第3天起有非常显著的统计学差异(P＜0.01)。结论采用含1％B27的DMEM／F12培养液或含1％N2和1％B27的DMEM／F12培养液进行SGCs的体外培养，细胞存活数量多，生长状态好。第三部分嗅鞘细胞对体外培养螺旋神经节细胞的作用目的研究OECs对体外培养SGCs生长、凋亡和增殖的影响。方法OECs经含10％FBS的DMEM／F12培养液培养纯化后，取嗅鞘细胞条件培养液(olfactory ensheathing cells conditioned medium，OECs CM)进行SGCs的体外培养，同时取成纤维细胞条件培养液(fibroblast conditioned medium，FBCM)和含10％FBS的DMEM／F12培养液作为对照，Neurofilement免疫荧光化学染色观察SGCs的生长，BrdU免疫荧光化学染色观察SGCs的增殖，TUNEL原位末端标记法观察SGCs的凋亡。分别比较在OECs CM组、FB CM组和FBS组3种培养条件下，SGCs在第1、3、5、7天细胞数量、凋亡率和增殖的变化。结果OECs CM能够维持较多的体外培养SGCs的细胞数量，并降低SGCs的凋亡率。OECs CM与FB CM或含10％FBS的DMEM／F12相比较，对SGCs细胞数量和凋亡率的影响有非常显著的统计学差异(P＜0.01)，而后二者之间无统计学差异(P＞0.05)。在OECs CM组第3天，发现少数SGCs发生增殖，其他时段及后二组的各个时段均未发现增殖的SGCs，OECs CM组第3天与其他时段及另二组各时段的细胞增殖数有非常显著的统计学差异(P＜0.001)。结论OECs CM能够维持较多的体外培养SGCs的数量，这种现象可能通过抑制SGCs的凋亡来实现。OECs CM可促进SGCs的增殖。第四部分参与嗅鞘细胞对螺旋神经节细胞作用的细胞因子和受体目的对OECs可能分泌的细胞因子和SGCs可能存在的细胞因子受体进行RT-PCR，初步分析OECs可能通过哪些细胞因子和受体参与促进SGCs存活和增殖，抑制SGCs凋亡的作用。方法分别对嗅球、培养的OECs和FB进行组织和细胞总RNA的抽提，cDNA的合成以及Laminin、NCAM、BMP-4、BMP-7、CNTF和bFGF等细胞因子的PCR反应；对耳蜗和SGCs进行α7 integrin、αⅤintegrin、BMPR-1A、BMPR-1B、BMPR-Ⅱ、CNTFR和FGFR-1等细胞因子受体的RT-PCR反应，观察各细胞因子和细胞因子受体mRNA的表达情况，根据嗅球、OECs表达的细胞因子和耳蜗、SGCs表达的受体的一致性判断哪些细胞因子和受体参与作用。结果嗅球和OECs对上述细胞因子的转录水平基本一致，均表达NCAM、BMP-4，OB还少量表达BMP-7，FB不表达上述6种细胞因子；耳蜗和SGCs对上述细胞因子受体的转录也一致，二者均表达BMPR-1A、NCAM、α7 integrin，耳蜗还表达BMPR-1B、BMPR-Ⅱ和CNTFR。结论α7 integrin、BMP4与BMPR-1A、以及NCAM可能参与OECs对SGCs的作用。