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目 的:本研究应用高糖诱导大鼠心肌细胞（H9c2）来模拟糖尿病心肌病炎症模型,以健脾益气中药复方作为干预因素,通过体外实验检测对TLR4/MyD88/NF-κ B信号通路相关因子的影响,以及验证健脾益气方含药血清对炎症介质的调控作用,探讨健脾益气法对2型糖尿病心肌病心肌炎症损伤的保护机制及其作用靶点,为糖尿病心肌病的预防与治疗提供新的中医临床药物选择。材料与方法:1.含药血清的制备选取SPF级SD雄性大鼠60只,8周龄,随机分为正常组、健脾益气组和二甲双胍组,每组各20只。正常组用生理盐水进行灌胃,健脾益气组和二甲双胍组分别用健脾益气方、二甲双胍灌胃,每日1次,连续灌胃4周。于末次灌胃1h后,采集大鼠腹主动脉血液并分离制备含药血清。2.健脾益气方对体外高糖诱导的H9c2心肌细胞炎症改变的抑制作用将体外培养传代的大鼠心肌细胞（H9c2）,随机分为4组:正常组、模型组、健脾益气组和二甲双胍组。除正常组外,其余各组均采用30mmol/L高糖培养基刺激H9c2心肌细胞56h,正常组与模型组加入正常血清,健脾益气组和二甲双胍组分别加入健脾益气方血清和二甲双胍血清对细胞进行干预,并分为12h、24h、48h（即在造模44h、32h、8h后加入药物）三个时间梯度进行,于56h后收集细胞上清,使用ELISA法检测各组细胞上清中促炎因子IL-6,TNF-α的表达含量,并探讨不同干预时间对疗效的影响。3.健脾益气方抑制高糖诱导的H9c2心肌细胞炎性改变作用的机制研究将体外培养传代的大鼠心肌细胞（H9c2）,随机分为6组:正常组、模型组、阻断剂组、健脾益气组、健脾益气方+阻断剂组及二甲双胍组。除正常组外,其余各组均采用30mmol/L高糖培养基刺激H9c2心肌细胞56h,正常组与模型组加入正常血清,阻断剂组、健脾益气组、健脾益气方+阻断剂组和二甲双胍组,分别加入正常血清+TAK阻断剂、健脾益气方血清、健脾益气方血清+TAK阻断剂和二甲双胍血清对细胞进行干预24h（即在造模32h后加药）,于56h后收集细胞。使用Real-timePCR和Western-blot方法分别检测TLR4、MyD88、NF-κ B mRNA及蛋白的表达。结 果1.Ⅱ9c2心肌细胞中白介素6（IL-6）表达的结果与正常组比较,模型组IL-6表达明显升高,差异具有统计学意义（p<0.05）;与模型组比较,各治疗组IL-6的表达均下降,差异具有统计学意义（p<0.05或p<0.01）,本实验将健脾益气组分为三个时间梯队（12h、24h、48h）对模型细胞进行干预,结果表明,与模型组相比,健脾益气组干预24h 比干预12h、48h的统计学意义更为显著。2.H9c2心肌细胞中肿瘤坏死因子（TNF-α）表达的结果与正常组比较,模型组TNF-α表达明显升高,差异具有统计学意义（p<0.05）;与模型组比较,各治疗组TNF-α的表达均下降,差异具有统计学意义（p<0.05或p<0.01）,本实验将健脾益气组分为三个时间梯队（12h、24h、48h）对模型细胞进行干预,结果表明,与模型组相比,健脾益气组干预24h 比干预12h、48h的统计学意义更为显著。3.H9c2心肌细胞中TLR4 mRNA及TLR4蛋白的表达结果与正常组比较,模型组的TLR4 mRNA和TLR4蛋白表达均升高,差异具有统计学意义（p<0.01）;与模型组比较,阻断剂组的TLR4 mRNA和TLR4蛋白表达出现下降（p<0.05）;与阻断剂组比较,健脾益气组、健脾益气方+阻断剂组、二甲双胍组TLR4 mRNA和TLR4蛋白表达量均下降（p<0.01）。各治疗组相比疗效依次为:健脾益气方+阻断剂组>二甲双胍组>健脾益气组。4.H9c2心肌细胞中MyD88 mRNA及MyD88蛋白的表达结果与正常组比较,模型组的MyD88 mRNA和MyD88蛋白表达均升高,差异具有统计学意义（p<0.01）;与模型组比较,阻断剂组的MyD88 mRNA和MyD88蛋白表达出现下降（p<0.05）;与阻断剂组比较,健脾益气组、健脾益气方+阻断剂组、二甲双胍组MyD88 mRNA和MyD88蛋白表达量均下降（p<0.01）。各治疗组相比疗效依次为:健脾益气方+阻断剂组>二甲双胍组>健脾益气组。5.H9c2心肌细胞中NF-κ B mRNA及NF-κ B蛋白的表达结果与正常组比较,模型组的NF-K B mRNA和NF-κ B蛋白表达均升高,差异具有统计学意义（p<0.01）;与模型组比较,阻断剂组的NF-κ B mRNA和NF-κ B蛋白表达出现下降（p<0.05）;与阻断剂组比较,健脾益气组、健脾益气方+阻断剂组、二甲双胍组NF-κ B mRNA和NF-κ B蛋白表达量均下降（p<0.01）。各治疗组相比疗效依次为:健脾益气方+阻断剂组>二甲双胍组>健脾益气组。结 论1.通过高糖诱导的H9c2心肌细胞中出现炎症因子IL-6、TNF-α的过度表达,并且各组炎症模型细胞中均发现NF-κ B mRNA及蛋白的表达增加,表明NF-κ B信号通路的过度激活与心肌细胞炎症损伤可能是共同促进DCM发生发展的机制。2.本实验运用健脾益气方进行干预治疗,可以抑制NF-κ B通路中促炎因子TNF-α和IL-6的表达,表明健脾益气方对高糖诱导的H9c2心肌细胞具有抗炎作用。3.健脾益气方可以抑制TLR4/MyD88/NF-κ B信号通路的表达,减轻糖尿病心肌病心肌细胞的炎症损伤,改善心功能,从而对DCM模型大鼠的心肌细胞具有保护作用。