目的:本文旨在研究抑癌基因PTEN缺失的小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）中抗氧化防御蛋白——过氧化物还原酶（Prx1,2,5,6）及铜锌-超氧化物歧化酶（Cu/Zn-SOD）表达下调对细胞抗氧化防御能力、细胞内活性氧（ROS）、脂质过氧化和DNA氧化损伤水平的影响,并探讨PTEN调控Prx1,2,5,6及Cu/Zn-SOD mRNA和蛋白表达的机制,以进一步完善PTEN的抑癌作用机理,对肿瘤的预防和治疗有一定的指导意义。方法:（1）用超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒比较对照(PTEN^+╱+ MEFs)及PTEN缺失MEFs细胞(PTEN^-/- MEFs)内SOD活力水平;不同浓度过氧化氢（H₂O₂）作用后,中性彗星电泳检测PTEN^+╱+ MEFs及PTEN^-/- MEFs细胞中DNA双链断裂（DSBs）水平;Western blot检测不同浓度H₂O₂预处理后PTEN^+/+ MEFs及PTEN^-/- MEFs细胞内DNADSBs产物磷酸化组蛋白H2AX（γH2AX）表达水平。（2） 2’7’-二氯荧光素双乙酸盐（DCFH-DA）和二氢乙啶（DHE）荧光探针分别标记细胞内H₂O₂和超氧阴离子(O₂^·-)结合荧光显微镜及流式细胞学检测PTEN^+╱+ MEFs及PTEN^-/- MEFs细胞中基础ROS(H₂O₂和O₂^·-)水平。（3）用丙二醛（MDA）检测试剂盒比较PTEN^+/+MEFs及PTEN^-/-MEFs细胞中脂质过氧化产物MDA水平;免疫细胞化学检测PTEN^+/+MEFs及PTEN^-/-MEFs细胞内DNA氧化损伤产物8-羟基脱氧鸟苷（8-OH-dG）水平;Western blot及免疫荧光染色检测PTEN^+/+MEFs及PTEN^-/-MEFs细胞中DNA DSBs产物γH2AX蛋白表达水平;中性彗星电泳进一步检测PTEN^+/+MEFs及PTEN^-/-MEFs细胞内DNADSBs水平。（4）磷脂酰肌醇激酶（PI3K）抑制剂LY294002作用PTEN^-/-MEFs细胞后,Western blot检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT（或称PKB）磷酸化水平;Western blot和Northern blot分别检测LY294002作用后PTEN^-/-MEFs细胞中Prx1,2,5,6及Cu/Zn-SOD蛋白和mRNA表达水平;Western blot进一步检测PTEN^+/+MEFs及PTEN^-/-MEFs细胞中转录因子FOXO3a磷酸化水平及LY294002作用PTEN^-/-MEFs细胞后FOXO3a磷酸化水平。结果:（1）PTEN缺失MEFs细胞抗氧化防御能力降低:PTEN^+/+MEFs细胞的SOD活力是PTEN^-/-MEFs细胞的2.09倍（p＜0.01）,说明PTEN^-/-MEFs细胞中SOD清除O₂^·-能力降低。中性彗星电泳结合Western blot检测显示PTEN^-/-MEFs细胞在0.01mmol/LH₂O₂作用后就出现具有统计学意义的DNA DSBs水平升高（p＜0.01）,而PTEN^+/+MEFs细胞则要在H₂O₂作用浓度达到0.1mmol/L时,才出现具统计学意义的DNA DSBs损伤增强（p＜0.01）,说明PTEN^-/-MEFs细胞清除H₂O₂、防御其诱发的DNA氧化损伤的能力降低。（2）PTEN^-/-MEFs细胞内基础ROS水平升高:流式细胞学显示荧光探针孵育的不同时间点,PTEN^-/-MEFs细胞内2’7’-二氯荧光素（DCF）和氧化乙啶（Eth）荧光水平均明显高于PTEN^+/+MEFs细胞（p＜0.05和p＜0.01）,荧光显微图像显示PTEN^-/-MEFs细胞内DCF和Eth荧光强度均明显高于PTEN^+/+MEFs,均表明PTEN^-/-MEFs细胞内H₂O₂和O₂^-水平升高。（3）PTEN缺失MEFs细胞脂质过氧化和DNA氧化损伤增强:PTEN^+/+MEFs细胞内MDA水平明显低于PTEN^-/-MEFs细胞（p＜0.01）,分别为1.3±0.1 nmol/mgprot和1.75±0.05 nmol/mgprot,说明PTEN^-/-MEFs细胞脂质过氧化水平升高,氧化损伤增强。免疫细胞化学显示PTEN^-/-MEFs细胞内8-OH-dG水平是PTEN^+/+MEFs细胞的3.1倍（p＜0.01）,说明PTEN^-/-MEFs细胞DNA氧化损伤水平升高。Western blot和免疫荧光染色显示PTEN^-/-MEFs细胞中DNA DSBs产物γH2AX蛋白表达水平明显高于PTEN^+/+MEFs（p＜0.01）,中性彗星电泳显示PTEN^+/+MEFs细胞平均尾力矩（15.48）明显低于PTEN^-/-MEFs细胞（22.03）（p＜0.01）,均表明PTEN^-/-MEFs细胞DNA DSBs损伤增强。（4）PTEN可通过拮抗PI3K/AKT通路促进Prx1,2,5,6及Cu/Zn-SODmRNA和蛋白表达并抑制FOXO3a磷酸化:Western blot和Northern blot显示PI3K抑制剂LY294002作用后,PTEN^-/-MEFs细胞中AKT激酶活化明显抑制,而Prx1,2,5,6及Cu/Zn-SOD蛋白和mRNA均表达增强,说明PTEN可通过拮抗PI3K/AKT通路促进Prx1,2,5,6及Cu/Zn-SOD基因转录和蛋白表达。此外,Western blot显示PTEN^-/- MEFs细胞中转录因子FOXO3a磷酸化水平升高,LY294002作用PTEN^-/-MEFs细胞后FOXO3a磷酸化水平降低,说明PTEN可通过拮抗PI3K/AKT通路抑制下游转录因子FOXO3a磷酸化。结论:（1）PTEN作为一个重要的抑癌基因,其缺失可引起抗氧化防御蛋白Prx1,2,5,6及Cu/Zn-SOD表达下调,由此导致细胞抗氧化防御能力降低,细胞内基础ROS水平升高,氧化压力诱发的脂质过氧化和DNA氧化损伤增强。表明PTEN在维持细胞内氧化还原环境、保护细胞免于氧化损伤和维持基因组稳定性方面起着重要作用。（2）PTEN可通过拮抗PI3K/AKT通路促进抗氧化防御蛋白Prx1,2,5,6及Cu/Zn-SOD基因转录和蛋白表达,并且可能通过该通路下游的FOXO3a等FOXO家族（FOXOs）转录因子对其转录进行调控。