【摘 要】
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目的探讨长链非编码RNA ITGB1在胆囊癌转移中的作用并探索相关机制。方法前期工作中我们利用高转移胆囊癌细胞株GBC-SD/M及其亲本细胞株GBC-SD行LncRNA芯片分析,发现Lnc-ITGB
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目的探讨长链非编码RNA ITGB1在胆囊癌转移中的作用并探索相关机制。方法前期工作中我们利用高转移胆囊癌细胞株GBC-SD/M及其亲本细胞株GBC-SD行LncRNA芯片分析,发现Lnc-ITGB1在GBC-SD/M高表达。本研究首先利用Real-time PCR验证Lnc-ITGB1在细胞和组织水平表达量,并建立Lnc-ITGB1表达量与临床病理资料和患者预后的相关性。然后,利用慢病毒工具构建针对Lnc-ITGB1的敲减载体和阴性对照载体,即Lv-shITGB1和Lv-shCon。将这2条载体转染入GBC-SD/M细胞,利用Real-time PCR检测敲减效率。继而通过划痕愈合实验、Transwell迁移小室实验和Transwell侵袭小室实验检测敲减Lnc-ITGB1对胆囊癌细胞迁移和侵袭能力的影响。最后通过western blot检测敲减Lnc-ITGB对上皮间质转换(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物和PI3K/AKT信号通路蛋白表达量的影响。结果Real-time PCR结果显示Lnc-ITGB1在GBC-SD/M中表达量显著高于GBC-SD,且差异有统计学意义(p<0.01)。胆囊癌组织中Lnc-ITGB1的表达量显著高于癌旁组织且转移癌组织中Lnc-ITGB1表达量高于非转移癌组织(p<0.05)。单因素生存分析结果显示高表达Lnc-ITGB1组患者存活时间较长(p<0.05)。转染慢病毒96小时后,Lv-shITGB1可成功敲减Lnc-ITGB1,敲减效率达97.1%(p<0.01)。划痕愈合实验结果表明,Lv-shITGB1组划痕愈合面积明显小于Lv-shCon组(32.796±7.312%vs 70.459±4.192%,p<0.01)。Transwell迁移小室实验结果显示,Lv-shITGB1组迁移到Transwell下层小室的细胞数明显低于Lv-shCon组(69.067±6.3 vs 137.133±7.2,p<0.01),Lv-shITGB1组下层小室结晶紫吸光度亦明显低于Lv-shCon组(p<0.01)。Transwell侵袭小室实验亦显示Lv-shITGB1组侵袭到下层小室的细胞数和结晶紫吸光度明显低于Lv-shITGB1组(p<0.01)。通过对比敲减和未敲减Lnc-ITGB1的胆囊癌细胞EMT相关标记物表达量,我们发现敲减Lnc-ITGB1后间质性标志物Vimentin、Slug和ZEB1的表达量明显下降。敲减Lnc-ITGB1后p-PI3K和p-AKT的表达量亦出现明显下降,而总PI3K和AKT的蛋白表达量未出现明显变化。结论Lnc-ITGB1可能通过调控EMT和PI3K/AKT信号通路促进胆囊癌细胞迁移和侵袭,可作为潜在的胆囊癌诊断和治疗靶点。
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