乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一。流行病学调查资料显示，在美国其发病率位居第二位，而其死亡率已经位居癌症相关死亡率的第一位。在我国，乳腺癌的发病率虽然较低，但在一些大中城市，如北京、上海，发病率呈逐年上升的趋势。乳腺癌的发病原因至今仍不明确，目前认为乳腺癌的发生发展与多种因素有关，例如遗传因素、内分泌因素、乳腺良性病变恶变等。尽管目前治疗手段多样，传统手术和化疗等治疗措施首次疗效较好，但由于乳腺癌具有易复发和早期转移等恶性生物学行为特征常导致治疗失败，因此深入研究乳腺癌恶性生物学行为的形成机制变得尤为重要。由19-25个核苷酸组成的、非编码的单链RNA被称为微小核糖核酸(microRNA，miRNA，miR)。这类小RNA在表达上具有组织和时间的特异性，是调节其他功能基因表达的重要调控分子，在生物的生长发育过程中发挥着重要作用。 miRNA主要通过与靶基因3’非编码区（UTR）完全互补或者部分互补结合从而使靶基因降解或翻译抑制，从而在转录后水平调节基因的表达。研究表明，多种的microRNA参与肿瘤的恶性转变过程，如恶性增殖，复发转移，凋亡抑制等。有研究报道，利用microRNA抑制剂降低乳腺癌细胞中高表达的miRNA-21后，抑制了乳腺癌细胞的增殖、迁移及肿瘤的生长。这一发现为乳腺癌的基因治疗提供的一个新的方向。本实验重点探讨一个新的miRNA-362-5p乳腺癌恶性生物学行为的影响，以及相关的作用机制。我们在实验当中首先检测了乳腺癌细胞MCF-7、MB231与正常细胞CCD-1095SK中miRNA-362-5p的表达差异，发现miRNA-362-5p在乳腺癌细胞中呈现高表达。为了探讨miRNA-362-5p的高表达是否影响乳腺癌的生物学行为，我们将miRNA-362-5p的抑制剂转染MCF-7细胞，MTT法检测细胞增殖结果显示，当MCF-7细胞中miRNA-362-5p的表达被抑制后，细胞的增殖能力受到了明显抑制。进一步通过流式细胞术检测发现这是由于转染后MCF-7细胞被限制在G0期向S期转化的进程中，而G2/M期未受明显影响。随后，我们通过划痕实验及Transwell方法检测细胞迁移，结果显示实验组细胞的迁移能力受到了明显的抑制。Transwell方法检测侵袭能力同样表明实验组细胞的侵袭能力被抑制。为了进一步验证miRNA-362-5p对肿瘤细胞克隆形成能力的影响，我们运用平板克隆实验及软琼脂实验检测结果显示细胞的克隆形成能力明显下降，细胞粘附实验结果显示实验组细胞的粘附能力亦受到抑制。有文献报导指出，miRNA对肿瘤细胞的凋亡亦有影响，因此我们利用顺铂诱导细胞凋亡，通过流式细胞术来检测其对乳腺癌细胞凋亡能力的影响，结果显示实验组的凋亡细胞数显著高于对照组，以上这些实验结果说明miRNA-362-5p的高表达有可能促进了乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，而抑制了其凋亡的发生。在我们实验室前期的研究当中发现，在白血病细胞中miRNA-362-5p通过靶向CYLD促进NF-κB信号通路的激活从而促进了白血病细胞的增殖和侵袭，为了验证在乳腺癌细胞中miRNA-362-5p是否同样是通过这一途径来发挥作用的，我们将miRNA-362-5p的抑制剂及模拟物分别转染MCF-7细胞及CCD-1095SK细胞，westernblot检测CYLD的表达情况及NF-κB信号通路的活化情况，结果显示在MCF-7细胞中当miRNA-362-5p被抑制后，CYLD的表达得到了恢复而入核的NF-κB则下调，在CCD-1095SK细胞中当miRNA-362-5p的表达恢复以后，CYLD的表达下调而入核的NF-κB则上调，由此说明在乳腺癌细胞中，miRNA-362-5p抑制了CYLD的表达从而促进了NF-κB信号通路的激活。总而言之，我们的实验结果表明miRNA-362-5p在乳腺癌MCF-7细胞中的高表达促进了细胞的增殖、迁移和侵袭，抑制了细胞的凋亡，这一作用可能与其抑制了CYLD的表达从而促进了NF-κB信号通路的激活有关。