【摘 要】
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鸡传染性鼻炎是由副鸡禽杆菌引起的一种传染性呼吸系统疾病,主要引起育成鸡生长停滞及蛋鸡产蛋率下降等。该病呈世界性分布,药物治疗易复发,给养鸡业造成了重大经济损失。膜
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鸡传染性鼻炎是由副鸡禽杆菌引起的一种传染性呼吸系统疾病,主要引起育成鸡生长停滞及蛋鸡产蛋率下降等。该病呈世界性分布,药物治疗易复发,给养鸡业造成了重大经济损失。膜蛋白参与调节细胞的多种生理功能,具有免疫原性,是细胞与外界环境进行物质转换、信号传导等的主要承担者。很多疾病的发生都与膜蛋白的缺失相关,目前针对活化膜蛋白或使膜蛋白失活的生物学研究越来越多,但有关副鸡禽杆菌膜蛋白的报道还较少。为了进一步优化鸡传染性鼻炎的防治措施,探讨副鸡禽杆菌膜蛋白的免疫原性,本研究采用TSA(trypticase soy agar)、TSB(trypticase soy broth)培养基,在相同的培养条件下,观察副鸡禽杆菌A(221)、B(0222)、C (Modesto)三个血清型菌株的生长变化,以确定最佳收菌时间;利用FOCUSTM Global Fractionation试剂盒制备三个血清型参考菌株的膜蛋白,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和双向(2-D)电泳(pH4-7),对副鸡禽杆菌膜蛋白的制备方法和差异膜蛋白的分析进行了研究,实验结果表明:1、相同的培养条件下,C型菌株存活时间最短,A、B型存活时间较长,菌液生长平台期都处于培养至13h-14h之间。2、三个血清型菌株的SDS-PAGE电泳图谱相似,主要条带均有7个,其分子质量相似,分别占A、B、C蛋白总量的74.06%、75.03%、67.56%。此外共有3个蛋白质条带分子质量相似,但蛋白质含量差异显著。3、三型膜蛋白的2-D电泳图谱共筛选出21个膜蛋白差异点。经串联质谱分析,确定了17个有效蛋白点,结合基因数据库分析鉴定为9种蛋白质,其生物学信息显示这几种蛋白质主要参与细菌免疫、调节细胞的新陈代谢、防御有害物质等多种生理功能。为揭示副鸡禽杆菌的免疫机理、致病机理和新型疫苗的研发奠定了良好的实验基础。
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