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枯草芽孢杆菌是能形成芽孢的革兰氏阳性芽孢属的模式菌株,是工业、食品、医用和饲用重组蛋白的生产优秀的宿主表达系统之一。本论文主要是研究了饲用酶制剂在枯草芽孢杆菌中的分泌表达和分泌机制,并构建了一套蛋白质量控制体系的系列敲除菌株,高效的分泌重组蛋白。本论文的实验内容主要分为三部分：实验一,利用基因工程的方法优化了蛋白分泌信号系统,建立了一套针对特定目的蛋白CBP21的信号多肽筛选体系,获得了与特定的目的蛋白CBP21表达匹配的信号肽,实现目的蛋白的优化表达。结果显示：YlqB对CBP21的引导分泌能力最优。实验二,研究了淬灭酶在枯草杆菌中的分泌表达和其分泌机制。结果表明AI06BS在没有信号肽的引导下能分泌到胞外。AI06BS在自溶基因lytC和lytD突变和双突变工程菌株中以及自溶抗性工程菌株LM2531的表达分析,表明AIO6BS不是由于细胞的溶解释放到胞外的。另外,实验表明AIO6BS在Sec途径、Tat途径和ABC transporter途径的突变菌的表达模式和野生型菌株中的没有明显的变化。这些结果表明,AIO6BS可能是通过非传统的分泌途径分泌到胞外的。我们对AIO6BS蛋白的cys267进行了饱和突变,分析了所有可能的氨基酸替换对AI06BS的蛋白质的分泌表达影响。位点cys267饱和突变结果表明,位点cys267对淬灭酶的合成与分泌是非常重要的氨基酸。另外,我们把AIO6BS的同源蛋白、非同源蛋白和分泌伴侣融合在其C端。这些结果表明融合蛋白没有输出到胞外,可能AIO6BS不能作为信号来引导其他重组蛋白的跨膜运输。实验三,建了一套高效的分泌重组蛋白的蛋白质量控制体系的系列敲除菌株为重组蛋白的表达提高提供了一套工具。影响重组蛋白分泌的瓶颈之一就是所谓的质量控制体系中的蛋白酶。对于枯草芽孢杆菌的胞外蛋白酶、细胞膜和细胞壁蛋白酶有详尽的研究,但是对枯草芽孢杆菌的胞内的蛋白质量控制系统研究的较少,尤其是关于胞内蛋白酶都重组蛋白的分泌表达的影响较少。本研究基于同源重组的原理方法,构建了胞内蛋白酶的系列敲除株。我们用非传统分泌蛋白AIOBS和Sec途径分泌的CBP21作为报告基因,分别分析了胞内蛋白酶敲除菌株对两种不同类型的重组蛋白的分泌表达影响。与野生型菌株相比较,CBP21在BSΔYlbL和BSΔMlpA菌株没有分泌表达,而在其他的突变株的表达量都有不同程度的增加。AIO6BS在BSΔAlbF菌株不能分泌表达,而在其他的突变株的表达量都有不同程度的增加。