绣球菌液态深层发酵及多糖抗癌细胞活性的研究

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绣球菌是一种非常珍稀名贵的药食两用真菌,其主要产地在吉林省安图、抚松、白山等林区,云南省丽江、中甸等市县林区,多糖是绣球菌具有活性成分的主要有效组分之一。本实验以绣球菌为实验对象,完成绣球菌子实体营养成分的分析,绣球菌子实体成分含量粗蛋白13.6%,脂肪1.1%,粗纤维14.8%,灰分3.5%,粗多糖2.8%。同时,研究了绣球菌子实体水提法的工艺条件,比较了热水浸提法、超声提取法和酶解提取法3种以绣球菌子实体多糖为实验指标的多糖提取方法,结果表明:绣球菌多糖热水浸提法,最佳料液比为1:40,最佳提取温度为80℃,最佳提取时间为2 h,最佳多糖提取率为2.61%;绣球菌多糖超声提取法法,最佳料液比为1:35,最佳提取温度为80℃,最佳超声时间为12.5 min,最佳超声功率为250 W,最佳多糖提取率为2.96%;绣球菌多糖酶解提取法,最佳酶解温度为50℃,最佳酶解时间为2.5 h,最佳酶浓度为为4%,最佳提取时间为0.75 h,最佳多糖提取率为3.06%,但是考虑到,酶提法所需成本太高,所用时间过长,所以本实验中选用了超声提取法。本实验采用液体发酵的方法获得绣球菌菌丝体和提取绣球菌多糖,确定了绣球菌摇瓶发酵培养基和培养条件,并研究了绣球菌从摇瓶发酵放大到4 L发酵罐发酵的液体深层发酵的工艺,结果表明:绣球菌摇瓶发酵的最佳培养工艺为:可溶性淀粉3%,硝酸铵0.3%,牛肉膏0.6%,KH2PO4 0.12%,最佳培养温度为23℃,最佳转速为110 r/min,绣球菌摇瓶发酵最佳多糖产量为0.352 mg/ml,绣球菌干重为1.15 g,多糖含量为3.06%,在摇瓶发酵最佳培养条件下绣球菌多糖含量比子实体提高了 9.28%。绣球菌液态摇瓶发酵放大到发酵罐发酵培养参数为,接种量10%,pH控制从48 h开始用2 mol/L的NaOH保持pH为5,调节搅拌转速最高不超过500 r/min,通气量6.72 L/min来保持发酵液溶氧在30%-40%,并在168 h时补充200 ml发酵罐补料培养液;培养8天,获得菌丝体干重48.08 g,绣球菌多糖1.49 g,优化了发酵罐培养条件和补料量及补料时间时间,使绣球菌液态发酵从摇瓶放大到4L发酵罐,多糖含量为3.1%,比摇瓶发酵提高了 1%,比子实体提高了 10.75%。实验用水提醇沉法获得绣球菌粗多糖,并对粗多糖进行除蛋白、脱脂、透析等精制,得到的绣球菌多糖,采用MTT法进行抗癌活性研究,结果表明,绣球菌多糖对Hela细胞具有抑制作用,且比发酵多糖比子实体多糖抑制效果有所提高;采用ELISA法,结果表明绣球菌多糖抗癌作用机制可能与抑制TNF-α产生,进而下调整个免疫应答过程有关,绣球菌可能具有抗癌活性。
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