论文部分内容阅读
目的探讨基因FAM172A(Family with sequence similarity 172 member A)在甲状腺滤泡癌中致病作用,并评估其在甲状腺滤泡癌中的术前诊断价值。材料和方法1.运用Western Blot和免疫组织化的方法检测人甲状腺滤泡癌组织以及癌旁组织中FAM172A的表达,运用免疫组化的方法检测不同甲状腺滤泡性肿瘤中FAM172A的表达,根据ROC曲线确定最佳临界点来鉴别甲状腺滤泡癌。2.运用RT-PCR和Western Blot检测正常人甲状腺细胞株和甲状腺滤泡癌细胞株中FAM172A的表达,运用慢病毒载体构建过表达和敲减FAM172A的稳转株,并运用CCK8、克隆形成实验、Transwell实验分别评估不同稳转细胞株的增殖、集落形成、转移和侵袭等生物学功能的改变情况,通过裸鼠皮下成瘤实验,评估敲减FAM172A的滤泡癌细胞株在动物体内生长和增殖能力的改变,运用RNA-seq测序技术分别对人甲状腺正常细胞Nthy-ori-3-1、人甲状腺滤泡癌细胞FTC-238、敲减FAM172A的甲状腺滤泡癌细胞shFAM172A-FTC-238、人甲状腺滤泡癌组织样本和癌旁组织样品进行测序,探究下游潜在的关键蛋白和重要信号通路,运用Western Blot检测潜在的下游关键肿瘤相关蛋白进行验证。3.运用超声引导下甲状腺细胞学穿刺和免疫组化,评估FAM172A鉴别甲状腺滤泡癌的术前诊断价值。结果1.FAM172A在人甲状腺滤泡癌组织高表达;在120例临床样本中,FAM172A评分的最佳临界点为3.5,鉴别甲状腺滤泡癌的敏感性为92%,特异性为63%。2.FAM172A在人甲状腺滤泡癌细胞株FTC-133和FTC-238中高表达。下调FAM172A表达后,细胞增殖能力、集落形成能力、迁移和侵袭能力均被明显抑制(P<0.05)。过表达FAM172A后,细胞增殖能力、集落形成能力、迁移和侵袭能力均明显增强(P<0.05)。裸鼠皮下成瘤实验表明下调FAM172A可以使FTC-133和FTC-238细胞株在裸鼠皮下成瘤能力明显下降(P<0.05)。FAM172A可通过抑制Erk1/2和JNK/c-JUN通路抑制人甲状腺滤泡癌的发生发展。3.在86例细胞穿刺样本中,FAM172A鉴别甲状腺恶性肿瘤的敏感性为82%,特异性为78%。结论1.FAM172A在甲状腺滤泡癌组织中的表达高于癌旁组织;人甲状腺滤泡癌细胞株FTC-133和FTC-238中的表达高于人甲状腺正常细胞株Nthy-ori-3-1;FAM172A在甲状腺滤泡癌组织中的表达高于恶性潜能未定和甲状腺腺瘤。2.沉默FAM172A可抑制甲状腺滤泡癌的增殖、迁移和侵袭,并通过Erk1/2和JNK/c-JUN通路促进甲状腺滤泡癌的发生发展。3.通过结合超声引导下穿刺细胞活检和免疫组化,FAM172A有望成为甲状腺滤泡癌术前诊断的分子标志物,其鉴别甲状腺恶性肿瘤的敏感性为82%,特异性为78%。