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研究目的本研究旨在探讨IQGAP1在胃癌细胞中调控上皮间质转化与化疗药物顺铂耐药性间的关系,为胃癌耐药方面提供新的治疗策略。研究方法1、CCK8法检测顺铂对胃癌细胞SGC7901和胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP的半数抑制浓度(IC50)。2、Western Blot检测SGC7901和SGC7901/DDP细胞的EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Snail、Vimentin和Slug的表达,Transwell迁移和侵袭实验评价SGC7901和SGC7901/DDP细胞的迁移和侵袭能力。3、Western Blot检测SGC7901和SGC7901/DDP细胞的IQGAP1蛋白表达水平。4、在SGC7901细胞中转染质粒pFlag-IQGAP1,在SGC7901/DDP细胞中转染针对IQGAP1的小干扰RNA,并通过Western Blot验证转染的效率。5、通过Western Blot检测SGC7901和SGC7901/DDP细胞转染前后EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Snail、Vimentin和Slug的表达变化,通过Transwell迁移和侵袭实验评价SGC7901和SGC7901/DDP细胞转染前后迁移和侵袭能力的变化。6、通过CCK8法检测SGC7901和SGC7901/DDP细胞转染前后顺铂IC50的变化。通过Western Blot检测SGC7901和SGC7901/DDP细胞转染前后耐药相关蛋白MRP1、MDR1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax蛋白水平变化。通过流式细胞术(Annexin V/PI双染色法)检测顺铂处理下SGC7901和SGC7901/DDP细胞转染前后凋亡率的变化。研究结果1、顺铂对SGC7901/DDP细胞的IC50是SGC7901细胞的4.9倍。2、E-cadherin蛋白在SGC7901细胞相对高表达,在SGC7901/DDP细胞相对低表达;N-cadherin、Snail、Vimentin和Slug蛋白在SGC7901细胞相对低表达,在SGC7901/DDP细胞相对高表达。SGC7901/DDP细胞比SGC7901细胞具有更强的迁移和侵袭能力。3、与SGC7901细胞相比,IQGAP1蛋白在SGC7901/DDP细胞中表达增高。4、Western blot结果表明pFlag-IQGAP1明显上调SGC7901细胞中IQGAP1的表达,IQGAP1-siRNA明显抑制SGC7901/DDP细胞中IQGAP1的表达。5、SGC7901细胞转染质粒pFlag-IQGAP1上调了IQGAP1的表达后E-cadherin蛋白表达下降,N-cadherin、Snail、Vimentin和Slug蛋白表达升高,迁移及侵袭能力增强。SGC7901/DDP细胞转染IQGAP1-siRNA下调IQGAP1的表达后E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、Snail、Vimentin和Slug蛋白表达降低,迁移及侵袭能力减弱。6、上调SGC7901的IQGAP1表达后顺铂的IC50升高,MRP1、MDR1、Bcl-2蛋白表达增高,Bax蛋白表达降低,顺铂处理下细胞凋亡率降低。下调SGC7901/DDP的IQGAP1表达后顺铂的IC50下降,MRP1、MDR1、Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,顺铂处理下细胞凋亡率升高。结论1、人胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP中IQGAP1呈过表达,并且IQGAP1参与胃癌细胞在耐药形成过程中EMT的发生。2、IQGAP1可能通过影响EMT参与了胃癌细胞对顺铂的耐药性。