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乳酸菌是人体肠道中重要的有益菌,可以与肠道粘膜免疫系统相互作用,在抑制肠道致病菌、调节机体免疫功能、维持肠道微生态平衡等方面发挥了重要作用。当肠道菌群的平衡受到破坏时,宿主的正常代谢就会受到扰乱,甚至导致疾病。本文对源于广西巴马和新疆和田长寿人群粪便中的乳酸菌进行体外分离筛选,研究其在体内的免疫调节作用,并利用实时荧光定量PCR技术和核磁共振技术探讨其对免疫低下大鼠肠道菌群及宿主代谢的影响,从而为益生菌干预亚健康膳食提供助益。(1)从广西巴马和新疆和田长寿人群粪便中分离乳酸菌,并研究其体外疏水能力、对细胞黏附能力、耐酸耐胆盐能力及抑菌特性和耐药性。结果表明,分离获得的153株乳酸菌中,10株乳酸菌的表面疏水能力较好、对细胞黏附能力较强；进一步研究发现,10株乳酸菌中菌株PW1、LV108、XJH301在pH2.0的人工胃液中培养2h后的存活率分别为34.08%、61.35%、47.15%,在人工肠液中培养4h后的存活率分别为61.42%、86.03%、55.03%,在浓度0.3%的胆盐MRS培养基中培养24h后的存活率分别为49.36%、45.24%、37.19%,显著高于其它菌株(P<0.05)；对大肠杆菌的抑菌圈分别为16.76mm、20.49mm、14.35mm,对沙门氏菌的抑菌圈分别为13.23mm、17.19mm、10.63mm,对金黄色葡萄球菌的抑菌圈分别为1176mm、14.01mm、10.10mm;菌株LV108对利福平、四环素、头孢唑啉、氯霉素、头孢拉定五种抗生素均敏感,对链霉素中度敏感,耐药性低于其他菌株；经API及16SrDNA测序将LV108菌株鉴定为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)。(2)以左旋咪唑作为阳性对照,通过连续3天腹腔注射40mg/kg环磷酰胺的方法建立免疫低下大鼠模型。在建模期间,大鼠体重增加缓慢,胸腺生长受到抑制。血清中的IL-2、IgG、IgA含量、溶血素含量显著降低(P<0.05)；大鼠肝、脾巨噬细胞的廓清指数K、吞噬指数α显著低于对照组(P<0.05),脾淋巴细胞数量显著下降(P<0.05),建模成功。干预4周后发现,L. rhamnosus LV108菌体悬浮液及其发酵乳能显著提高大鼠脾脏指数和胸腺指数(P<0.05)；同时还能显著增加大鼠血清中IL-2、ⅠgG含量(P<0.05)；刺激B淋巴细胞分化增殖,提高血清中的溶血素含量；显著提高免疫低下大鼠的肝、脾巨噬细胞廓清指数K、吞噬指数α(P<0.05),提高了大鼠单核巨噬细胞系统功能；促进大鼠脾淋巴细胞增殖,进而参与机体脾淋巴细胞的免疫应答。(3)利用实时荧光定量PCR法研究大鼠肠道菌群的变化。结果表明,与对照组相比,免疫低下大鼠肠道菌群发生了变化,其中乳酸菌和双歧杆菌的含量显著降低(P<0.05)而肠杆菌和肠球菌的含量显著增加(P<0.05)。干预4周后发现,L. rhamnosus LV108菌体悬浮液及其发酵乳能显著降低大鼠肠道中肠杆菌、肠球菌的含量(P<0.05),而显著增加大鼠肠道中乳酸菌及双歧杆菌含量(P<0.05)。L. rhamnosus LV108发酵乳对大鼠肠道菌群的改善幅度要大于L. rhamnosus LV108菌悬液,表明活的LV108菌体既能通过自身发挥作用,还能通过其代谢产物来改善肠道菌群。相关性分析发现,大鼠肠道内乳酸菌的含量同其血清中TNF-a及ⅠgA的水平呈显著正相关(P<0.05)。(4)利用核磁共振技术研究大鼠肠道代谢产物的变化。结果发现,与对照组相比,免疫低下大鼠粪便代谢产物中异亮氨酸、丙氨酸、丁酸、琥珀酸、磷酸肌酸、氧化三甲胺、牛磺酸、β-葡萄糖、α-葡萄糖、尿嘧啶等成分含量降低。L. rhamnosus LV108菌体悬浮液及发酵乳对大鼠进行4周干预后,增加了大鼠粪便代谢产物中异亮氨酸、丙氨酸、赖氨酸等氨基酸的含量,改善了大鼠的氨基酸代谢和能量代谢；增加了乳酸、琥珀酸等有机酸的含量,抑制了肠道中致病菌的生长；增加了α-葡萄糖、N-乙酰糖蛋白、TMA、β-葡萄糖等成分的含量,改善了机体肠道菌群的代谢。