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目的:探讨牛痘疫苗致炎兔皮提取物(神经妥乐平/NTP)联合玻璃酸钠(HA)注射液对兔膝关节创伤性关节炎的作用效果,为临床药物治疗创伤性关节炎提供动物实验资料。方法:选取成年健康新西兰大白兔,雌雄各半,采用切断大白兔右膝关节前后交叉韧带和完全切除内侧半月板的方法,以抽屉实验确认前后交叉韧带完全断裂,建立创伤性关节炎动物模型。成功建立创伤性关节炎模型后,将40只模型动物兔随机分为4组,每组10只,雌雄各半。实验1组为Control组(空白对照)经关节腔内单独注射生理盐水,剂量为0.1 ml/kg;实验2组为HA组经关节腔内单独注射玻璃酸钠,剂量为0.05ml/kg(每支药物2ml,含玻璃酸钠20mg);实验3组为NTP组经关节腔内单独注射牛痘疫苗致炎兔皮提取物,剂量为0.1ml/kg(每支药物3ml,含神经妥乐平3.6单位);实验4组为NTP+HA联合用药组经关节腔内联合注射牛痘疫苗致炎兔皮提取物和玻璃酸钠两种药物,剂量同上。注射时间为建立模型手术后第5周开始,每周2次,连续4周;于术前3天、术后2周、4周、6周、8周、10周分别抽取关节液样本,用ELISA方法行IL-1、TNF-α和MMP-3值的检测;停药2周后处死动物,采集关节软骨样品,进行组织形态学检测。结果:实验过程中Control组和HA组各死亡1只兔,实际纳入结果分析的兔为38只。1、术前3天及术后2周和4周,NTP+HA、NTP、HA、Control组兔的IL-1值分别为42.892±4.54、45.497±4.43、44.281±4.54、43.319±1.72及112.660±5.49、112.294±4.54、112.087±6.77、109.151±3.07和97.118±4.54、97.231±4.17、100.479±3.61、98.220±2.67;TNF-α值分别为71.650±4.53、72.767±4.54、75.150±3.92、74.680±4.54及121.435±4.54、123.274±5.15、124.680±4.58、125.372±5.39和172.963±6.33、168.837±4.44、169.362±4.54、172.889±3.88;MMP-3值分别为0.409±0.100、0.388±0.153、0.381±0.100、0.309±0.100及1.734±0.099、1.754±0.092、1.665±0.100、1.659±0.155和3.891±0.100、3.958±0.094、3.987±0.098、3.901±0.147。术后2周和4周各组兔的IL-1、TNF-α和MMP-3的值均显著高于术前3天(p﹤0.05),在上述3个时间点四组动物之间的上述三项指标值分别比较,均无统计学差异(p﹥0.05)。这些结果表明,兔膝关节创伤性关节炎动物模型成功建立。2、术后6、8和10周,NTP+HA、NTP、HA、Control组兔IL-1的值分别为66.814±4.54、82.614±3.82、78.365±4.54、88.743±3.60,52.382±4.33、72.113±4.54、64.210±4.54、81.517±2.54和44.336±4.54、64.704±5.39、59.894±4.54、76.550±3.90;TNF-α值分别为124.810±4.54、144.614±4.54、133.136±7.92、164.780±4.54,108.651±4.54、126.882±4.54、117.630±4.19、158.621±4.54和86.552±4.54、110.673±4.54、97.812±4.54、147.423±4.55;MMP-3值分别为2.191±0.100、3.023±0.100、2.675±0.092、3.480±0.100,1.680±0.100、2.650±0.100、2.073±0.100、2.973±0.100和1.248±0.100、2.008±0.103、1.730±0.100、2.522±0.100。关节腔内注射药物4、6周后(术后8、10周),NTP+HA、NTP和HA三组兔的IL-1、TNF-α和MMP-3值均显著低于Control组兔的这些值(p﹤0.05),其中NTP+HA组兔的该三项指标值均显著低于NTP和HA组兔(p﹤0.05),而且,HA组兔的这些值均略低于NTP组兔。此外,关节腔内注射药物4、6周后(术后8、10周),NTP+HA、NTP和HA三组兔的IL-1和TNF-α值均显著低于其术后2和4周的值(p﹤0.05),尽管稍微高于其术前3天的这些值(p﹥0.05)。而且,此时上述三组兔的MMP-3值虽然稍明显高于其术前3天的值,但是显著低于其术后4周的该值(p﹤0.05)。然而,此时,Control组兔的IL-1、TNF-α和MMP-3值均非常显著地高于其术前3天的这些值(p﹤0.01),虽然较明显低于其术后4周的该值(p﹤0.05)。3、停药2周后,NTP+HA组兔关节大体标本显示,滑膜轻度充血增生,滑液量稍增多,软骨表面不平整,裂纹不明显,软骨变软,无骨赘形成。镜下示:软骨组织损伤以轻度为主,未见明显裂隙,表面不平整,簇聚的软骨细胞增加,潮线基本完整,基质染色较轻;NTP组兔关节大体标本显示,关节面软骨中重度增生,滑液色黄,粘稠,部分软骨表面出现裂纹,部分深达骨质,溃疡形成明显,有部分骨赘形成,光镜下可见中重度软骨损伤,软骨表层明显纤维化,裂隙数量较多,部分深达深层,多量软骨细胞簇聚,潮线不完整或有消失,核碎裂或溶解的细胞数量中等,苏木素-伊红染色不均匀,深层有失染现象;HA组兔关节大体观察可见,关节面软骨轻度增生,滑液色黄,表面可见裂纹,局部溃疡形成,无明显骨赘形成,无软骨下骨暴露;光镜下可见中度软骨损伤,软骨表层纤维化,裂隙可达中间层,多量软骨细胞簇聚,潮线不规则或断裂,有少量细胞溶解或固缩,苏木素-伊红染色不均匀;然而,Control组兔的关节大体标本显示,关节面表面滑膜部分呈结节样增生,滑液量少有浑浊感,表面可见深度裂纹及大面积溃疡形成,少数关节面可见软骨下骨暴露并伴有骨赘形成。镜下见重度软骨损伤,大范围的软骨纤维化,细胞数量减少,伴有核溶解或核固缩,潮线不明显或消失,苏木素-伊红染色有失染现象。这些结果表明,NTP对关节软骨具有一定的保护作用,玻璃酸钠与NTP联合用药可协同增强保护和修复关节软骨的作用。结论:(1)牛痘疫苗致炎兔皮提取物对关节软骨具有一定的保护作用,其作用效果略差于玻璃酸钠。(2)玻璃酸钠与牛痘疫苗致炎兔皮提取物联合行关节腔内注射,可明显地协同增强对创伤性骨关节炎关节软骨的保护和修复具有作用。