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目的:研究盐酸戊乙奎醚对肝移植围术期肝缺血再灌注损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。
材料与方法:符合本实验条件的肝移植患者60例,随机分为三组:对照组(C组)、实验组1(组Ⅰ)和实验组2(组Ⅱ)。实验中12例予以排除,最终进入本研究的共48例,三组分别为17、15和16例。
均采用静吸复合全麻,以常规方法行麻醉诱导、维持、术中监测及管理。
无肝期30 min开始,组Ⅰ、组Ⅱ分别静脉持续泵入盐酸戊乙奎醚0.1 mg/kg、0.2 mg/kg(均以生理盐水稀释至100ml,速度为1.5ml/min);C组:静脉泵入等容生理盐水,速度同实验组。三组均分别于无肝期30min(再灌注前)、再灌注后60(Ⅲ+60)、120(Ⅲ+120)、180min(Ⅲ+180)及24h(Ⅲ+24h) 自上腔静脉采血,测定谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)和白介素-8(IL-8)。再灌注后180 min时取部分移植肝组织,一部分甲醛固定,HE染色,光镜观察肝组织病理组织学变化;另一部分液氮保存测定肝组织核因子-кB(NF-кB)蛋白表达量及其与靶基因的结合活性。供肝植入前取部分供肝组织作自身对照。
结果:
1.三组患者基本情况、供肝条件、术中情况等差异无统计学意义(P>0.05)。
2.肝功能
2.1三组患者血清ALT、AST于再灌注前差异无统计学意义(P>0.05)。
2.2血清ALT组内比较:①C组、组Ⅰ均于Ⅲ+60开始升高并达峰,Ⅲ+24h下降(P<0.05);②组Ⅱ于Ⅲ+60开始升高,Ⅲ+180达峰(P<0.01),Ⅲ+24h下降(P<0.01)。
组间比较:组Ⅰ、组Ⅱ于Ⅲ+60、Ⅲ+120及Ⅲ+180时与C组差异无统计学意义(P>0.05),但组Ⅱ于Ⅲ+24h低于C组(P<0.05),且高峰出现晚,持续时间短。
2.3血清AST组内比较:①C组于Ⅲ+60开始升高,Ⅲ+180达峰(P<0.01),Ⅲ+24h有下降趋势(P>0.05);②组Ⅰ开始升高及达峰时间同C组,但Ⅲ+24h明显下降(P<0.01);③组Ⅱ于Ⅲ+60开始升高,Ⅲ+120达峰(P<0.01),Ⅲ+180有下降趋势(P>0.05),Ⅲ+24h明显下降(P<0.01)。
组间比较:再灌注后大部分时间点,组Ⅰ、组Ⅱ均低于C组(P<0.05)。
3.肝组织病理组织学结果两实验组肝组织病理组织学改变明显轻于C组:肝小叶结构较完整,肝细胞肿胀较轻,出血、坏死带面积较小。
4.血清中细胞因子
4.1三组TNF-α、IL-1及IL-8再灌注前差异无统计学意义(P>0.05)。
4.2血清TNF-α
组肉比较:①C组于Ⅲ+60开始升高,Ⅲ+120达峰(P<0.01),Ⅲ+24h有所下降(P>0.05);②组Ⅰ、组Ⅱ均于Ⅲ+120开始升高并达峰(P<0.01),Ⅲ+24h明显下降(P<0.05);
组间比较:①组Ⅰ于Ⅲ+60低于C组(P<0.01);②组Ⅱ于Ⅲ+60、Ⅲ+120和Ⅲ+180均低于C组(P<0.01或P<0.05),且组Ⅱ于Ⅲ+60和Ⅲ+120低于组Ⅰ(P<0.01或P<0.05)。
4.3血清IL-1组内比较:①C组于Ⅲ+60开始升高并达峰,Ⅲ+24h明显下降(P<0.05);②组Ⅰ、组Ⅱ均于Ⅲ+60开始升高,Ⅲ+120达峰(P<0.01),Ⅲ+24h明显下降(P<0.01或P<0.05)。组间比较:①组Ⅰ、组Ⅱ于Ⅲ+60和Ⅲ+180时均低于C组(P<0.05),且组Ⅱ于Ⅲ+24h仍低于C组(P<0.05);②组Ⅰ与组Ⅱ之间差异无统计学意义(P>0.05)。
4.4血清IL-8组内比较:①C组于Ⅲ+120开始升高并达锋(P<0.05),Ⅲ+24h与再灌注前差异无统计学意义(P>0.05);②组Ⅰ、组Ⅱ于Ⅲ+60、Ⅲ+120、Ⅲ+180及Ⅲ+24h虽均有所升高,但与再灌注前差异无统计学意义(P>0.05)。
组间比较:①组Ⅰ、组Ⅱ于Ⅲ+120、Ⅲ+180及Ⅲ+24h均低于C组(P<0.05或P<0.01);②组Ⅰ与组Ⅱ之间差异无统计学意义(P>0.05)。
5.肝组织中NF-кB
5.1肝细胞浆中NF-кB蛋白表达量组Ⅰ、组Ⅱ均明显低于C组(P<0.01),且组Ⅱ较组Ⅰ更低(P<0.05)。
5.2入核后NF-кB与靶基因的结合活性组Ⅰ、组Ⅱ均明显低于C组(P<0.01),但组Ⅰ与组Ⅱ之间差异无统计学意义(P>0.05)。
6.细胞因子与NF-кB之间的相关性三组Ⅲ+180时的IL-8水平与NF-кB蛋白表达量及其结合活性之间均呈线性正相关。
结论:
1.盐酸戊乙奎醚能降低肝移植围术期血清ALT和AST的水平,减轻肝缺血再灌注损伤,对移植肝肝功能有保护作用。
2.盐酸戊乙奎醚可减少围术期血清炎性因子的释放,从而减轻炎症反应;并通过减弱再灌注后NF-кB的蛋白表达,并抑制其入核后与靶基因的结合活性,降低血清IL-8的水平,从而减少中性粒细胞浸润。这可能是其减轻肝缺血再灌注损伤的作用机制之一。
3.盐酸戊乙奎醚0.2 mg/kg减轻肝移植围术期肝缺血再灌注损伤的作用更强。