立题依据多形性胶质母细胞瘤(Glioblastoma,GBM)为多发于成人颅内的中枢神经系统肿瘤,是一项重大的社会公共卫生问题,目前主要治疗手段为手术切除结合药物化疗。替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)是GBM的一线化疗用药,能使GBM细胞DNA分子发生烷基化(O6-MeG)损伤,致DNA分子双链断裂,细胞死亡。TMZ能高效通过血脑屏障,渗透到脑组织细胞中,在GBM的早期治疗中效果突出。然而,06-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(06-methylguanine-methyltrasferase,MGMT)能迅速将TMZ介导生成的06-MeG中的甲基转移至自身的活性半胱氨酸残基上,修复TMZ所致肿瘤细胞的DNA损伤,细胞继续存活,导致耐药。目前,TMZ化疗耐药主要分为两大类:MGMT依赖性与非MGMT依赖性。而MGMT表达异常在胶质瘤细胞对TMZ耐药过程中起着重要作用。GBM细胞中MGMT的表达被证实接受miR-222的负向调控。研究发现,作为长链非编码RNA(lncRNA)的生长停滞特异性转录本5(GAS5)与mir-222存在碱基互补基础上的结合位点,同样接受后者的调控。那么GAS5很有可能作为内源竞争RNA(ceRNA)与miR-222结合,从而形成对MGMT表达的表观遗传调控,参与GBM细胞对TMZ的耐药过程。研究发现,miR-222/GAS5轴在多种肿瘤的发生及发展中起着重要作用。但是miR-222/GAS5在TMZ对GBM细胞所致DNA损伤及细胞毒性中的作用及机制尚不清楚。目的本课题旨在阐明miR-222/GAS5在TMZ所致GBM细胞(T98G)DNA损伤及细胞毒性中的作用及机制。研究方法分别转染miRNA模拟物和抑制剂建立miR-222表达差异样本组;以CCK-8细胞活性实验研究miR-222对T98G增殖能力及TMZ对T98G的细胞毒性;以彗星电泳法(SCGE)检测miR-222对TMZ诱导T98G细胞DNA损伤的影响;qRT-PCR检测分析miR-222、MGMT、GAS5表达水平;以Pearson相关分析法作关联性分析。结果1、miR-222表达水平分别与GAS5、MGMT的存在负相关;2、GAS5与MGMT的表达水平存在正相关;3、TMZ诱导脑胶质瘤的DNA损伤反应、细胞毒性与GAS5、MGMT存在负相关;4、TMZ诱导脑胶质瘤的DNA损伤反应、细胞毒性与miR-222存在正相关。结论1、miR-222/GAS5轴影响TMZ所致T98G细胞的DNA损伤反应;2、miR-222/GAS5轴影响TMZ所致T98G细胞的细胞毒性;3、miR-222/GAS5轴能对MGMT表达实施表观遗传调控;4、miR-222/GAS5轴对TMZ所致T98G细胞的DNA损伤反应与MGMT的表达有关。