论文部分内容阅读
食用菌菌糠富含多糖等生物活性物质,合理有效利用菌糠既可以解决资源浪费、环境污染问题,又可以延长食用菌产业链。本课题优化了长根菇菌糠多糖(Oudemansiella radicata residue polysaccharides,RPS)的提取条件,分析了RPS的单糖组成、键型以及对CCl4诱导的慢性肝损伤(Chronic liver injury,CLI)小鼠的体内抗氧化、抗炎症、抗纤维化和抗细胞凋亡等修复作用。主要研究结果如下:(1)RPS的提取优化。Plackett-Burman(PB)和响应面(Response surface methodology,RSM)试验确定了RPS的最佳提取条件为加水倍数40、提取次数2.08、醇沉时间24h,在此条件下,预测理论得率为3.41%。为方便操作,调整提取工艺条件为加水倍数40、提取次数2、醇沉时间24h,在此条件下,预测理论得率为3.40%,实际验证得率为3.38%。经除蛋白、脱色素、透析和冷冻干燥等步骤得到纯化后RPS。(2)RPS的结构分析。高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)结果表明,半乳糖、木糖和阿拉伯糖是RPS中的主要单糖,摩尔比为2.25:2.72:2.34。红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)分析,RPS具有多糖的特征吸收峰,是含有β-型糖苷键的吡喃糖。(3)RPS对CCl4诱导的慢性肝损伤的修复作用。(1)RPS干预后,高剂量RPS(400mg/kg)能显著提高小鼠肝脏中抗氧化酶超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性;降低细胞色素P450 2E1(Cytochrome P4502E1,CYP2E1)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和脂质过氧化物(Lipid peroxidation,LPO)水平,有效抑制肝脏中脂质过氧化作用。(2)肝脏中促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)水平显著下降。(3)免疫印迹结果表明,RPS通过降低NF-κB通路中促炎因子p-p65(Phosphorylated p65,磷酸化p65)的表达水平和增加炎症抑制因子I-κBα(Inhibitor of nuclear factor kappa-Bα,核因子κB抑制蛋白α)的表达水平来减轻炎症反应。(4)RPS能通过降低促纤维化细胞因子TGF-β1(Transforming growth factor-β1,转化生长因子-β1)的水平来缓解肝纤维化。(5)定量实时聚合酶链反应(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)结果表明RPS可通过下调Bax的相对mRNA表达量并上调Bcl-2(B-cell lymphoma-2,B淋巴细胞瘤-2)的相对mRNA表达量来实现抗细胞凋亡作用。(6)小鼠肝脏组织病理学观察包括苏木精-伊红(Hematoxylin and eosin,H&E)染色、马松染色和细胞凋亡荧光染色分别说明RPS可以改善小鼠的炎症、纤维化和细胞凋亡的程度。上述结果表明RPS具有体内抗氧化、抗炎症、抗纤维化和抗细胞凋亡活性,能一定程度上对CCl4诱导的慢性肝损伤起到修复作用,为天然保肝护肝药物开发提供新的参考。