鹅源粪肠球菌毒力因子fsrC的克隆表达和生物信息学分析

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构建pMD18-T-fsrC重组质粒,将鹅源粪肠球菌毒力因子fsrC导入DH5α宿主菌,在克隆子中进行自我复制;将构建pET-28a-fsrC重组质粒导入BL21工程菌,进行转录、翻译,并对fsrC蛋白检测及生物信息学分析。  根据GenBank公布的粪肠球菌fsrC基因序列设计与合成引物;以鹅源粪肠球菌全基因组为模板,利用PCR技术获得毒力因子fsrC基因片段,与pMD18-T克隆载体连接,导入DH5α宿主菌内,进行序列测定。经酶切后得到的毒力因子fsrC基因片段,与pET-28a表达载体连接,导入BL21工程菌内,用IPTG诱导表达后,SDS-PAGE检测fsrC蛋白。应用生物信息学软件对fsrC蛋白序列进行多重比对,构建系统进化发育树状图;分析fsrC蛋白的理化性质和组成成分;预测fsrC蛋白的结构、fsrC mRNA的二级结构、fsrC蛋白的亚细胞定位和fsrC蛋白的抗原表位。  成功克隆鹅源粪肠球菌毒力因子fsrC,其碱基序列为1326bp,编码441个氨基酸。成功构建pET-28a-fsrC/BL21重组质粒。SDS-PAGE检测fsrC蛋白大小为51KD;鹅源粪肠球菌毒力因子fsrC蛋白的氨基酸所在位置106~109、132~133、169~170等处存在β-转角结构,91~92、130~132、167~169等处存在无规则卷曲结构;fsrC蛋白三级结构显示毒力因子fsrC蛋白在质膜外形成3个结构域,质膜内形成1个结构域;fsrC mRNA二级结构,显示双链结构、内部环、发夹环、多分支环和单链区等多种mRNA二级结构元件;fsrC蛋白分布在分泌通路信号肽(SP)和质膜的比例较大;fsrC蛋白B细胞抗原表位,氨基酸序列第387~394位置共8个表位氨基酸,其余位置表位氨基酸数较少。  克隆出鹅源粪肠球菌毒力因子fsrC; fsrC蛋白在工程菌中得到表达;生物信息学预测鹅源粪肠球菌毒力因子fsrC蛋白具有组氨酸蛋白激酶的功能和调控鹅源粪肠球菌明胶酶和丝氨酸蛋白酶表达的可能性;鹅源粪肠球菌毒力因子fsrC蛋白的抗原性较小。
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