【摘 要】
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该文设计合成三链形成寡核苷酸(triplex forming olibonucleotide,TFO)进行三链形成实验;并运用竞争性凝胶滞留分析(cGRA)技术研究-1559~-814bp(745bp)DNA片段内189bp及280bp
【出 处】
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湖南医科大学 中南大学湘雅医学院 中南大学
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该文设计合成三链形成寡核苷酸(triplex forming olibonucleotide,TFO)进行三链形成实验;并运用竞争性凝胶滞留分析(cGRA)技术研究-1559~-814bp(745bp)DNA片段内189bp及280bp、178bp DNA片段与HeLa细胞核抽提物的结合情况.随后将能够与HeLa细胞核抽提物结合的189bp DNA全片段和94bp、62bp DNA片段插入luc报告基因栽体pGL2-Promoter,构建三个luc基因重组子.将这些重组子与含l.4kb、745bp、280bp和178bp DNA片段的重组luc基因通过脂质体转染技术导入HeLa细胞,检测其瞬时表达.结果显示:1.189bp DNA片段上不能形成三链.2.在HeLa细胞核抽提 物中存在与189bp DNA片段特异性结合的反式作用因子,其结合部位主要位于94bp和62bp DNA片段中.280bp、178bp DNA片段与特定HeLa细胞核抽提物蛋白质特异性结合.3.在HeLa细胞中189bp、94bp及62bp DNA片段均显著增强luc基因表达,而l.4kb、745bp、280bp和178bp DNA片段显著抑制基因表达.
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