胶质瘤是最为常见的颅内肿瘤，以其疗效差、生存率低、易复发等特点严重威胁人类的生命和健康。但是胶质瘤多数仅局限于颅内，很少发生远处转移，这也使胶质瘤成为一个很适于基因治疗的靶位点。当前，肿瘤基因治疗所面临的一个主要问题是基因载体的低效率，而单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因治疗中存在的旁观者效应则至少在一定程度上使该问题得以解决。旁观者效应的机理尚有争议，但是细胞间缝隙连接通讯(GJIC)通过介导细胞毒性的三磷酸化GCV在细胞间传播而在旁观者效应中发挥重要作用已是共识。鉴于多数肿瘤细胞存在GJIC缺陷，通过上调肿瘤细胞的GJIC、进而增强旁观者效应和HSV-tk基因治疗的疗效也成为肿瘤治疗的一条可行之路。 从基因治疗的角度出发，使肿瘤细胞表达外源性缝隙连接蛋白编码基因(connexin)是达到上述目的的一个经典途径；而很多药物也具有调节GJIC的作用。本研究从这两个层面入手，对促进旁观者效应和胶质瘤HSV-tk基因治疗的疗效进行研究。 实验中首先通过药敏实验筛选得到对GCV高度敏感的C6大鼠胶质瘤细胞HSV-tk转染克隆，命名为C6tk，并利用PCR对C6tk细胞及其他对GCV不敏感的转染克隆的HSV-tk基因整合进行检测。在所有克隆的基因组DNA均检测到HSV-tk基因，说明GCV耐药克隆产生的原因是由于外源基因不能在宿主细胞内正常表达。C6胶质瘤细胞与C6tk细胞按不同比例混合，分别以1000、2000、5000个／孔的密度接种于96孔细胞培养板，进行体外旁观者效应实验。经GCV作用7天后，以MTT法检测细胞的存活情况。在5000个／孔混合细胞接种组观察到更明显的旁观者效应，这说明了细胞间接触是产生旁观者效应的必要条件，也从侧面反映了GJIC在旁观者效应中的重要作用。在后续的体外旁观者效应实验，混合细胞均以5000个／孔的密度接种。 为增强C6胶质瘤细胞低水平的GJIC，本研究选用星形胶质细胞中最主要的connexin基因，Cx43，进行转染。由于C6tk细胞表达新霉素抗性，Cx43 cDNA首先被克隆入潮霉素抗性载体。经Cx43基因稳定转染后，通过染料传输实验筛选，得到表达高水平GJIC的克隆C6-Cx43和C6tk-Cx43。半定量Cx43 RT-PCR的结果显