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背景：胰腺癌是最难治的恶性肿瘤之一,5年生存率<5%,手术是唯一可能获得治愈的手段,但仅适用于不到20%的患者,且预后仍不容乐观,需要术后辅助治疗的支持。Vasohibin2(VASH2)最初被认为是一种促血管生成因子,但是它在肿瘤发生发展过程中的作用尚不明确。方法：通过定量PCR和western blot等方法检测胰腺癌组织及细胞株中VASH2基因的表达情况；通过生物信息学软件预测与VASH2相互作用的microRNA;通过定量PCR检测.miR-200a/b/c在胰腺癌细胞株中的表达,并统计分析miR-200a/b/c与VASH2在胰腺癌细胞株中的相关性；体外转染miR-200a/b/c模拟物及抑制物,观察其对VASH2转录和表达的影响；3’UTR荧光报告基因实验检验miR-200a/b/c与VASH2的相关性：启动子实验分析VASH2对miR-200a/b/c表达的影响。结果：我们发现VASH2在胰腺癌组织及癌旁组织中存在差异性表达,呈现癌组织表达明显升高的现象。另外,通过生物信息学软件分析,miR-200a/b/c,作为与VASH2高度匹配的microRNA之一,与VASH2在胰腺癌细胞株中存在显著负相关性。通过转染miR-200模拟物、抑制物及3’UTR萤光报告基因实验验证VASH2为miR-200a/b/c的特异性靶基因之一。反过来,VASH2对miR-200a/b/c的转录具有负向调控作用。结论：VASH2在胰腺癌组织中的表达呈明显升高趋势；miR-200a/b/c作为VASH2的特异性microRNA,在转录后水平特异性调控VASH2的表达；同时,VASH2的表达能够负向调控miR-200a/b/c的转录。背景：先前的报道证实VASH2具有促进血管生成的作用。本实验室前期通过对比胰腺癌组织和癌旁组织中中VASH2的表达,发现VASH2明显高表达于癌组织当中。显著的差异性表达提示VASH2可能不仅具有促血管生成的功能。另外,生物信息学软件预测及前期实验证实,VASH2与miR-200具有密切的相互作用。而miR-200最主要的功能是调控上皮间质转化的过程。我们猜想VASH2可能对于上皮间质转化具有重要作用。目的：检测VASH2的表达变化对胰腺癌细胞株EMT表型标志物的改变；检测VASH2对于胰腺癌细胞的恶性行为的改变；初步探讨VASH2调节EMT可能的信号通路。方法：筛选出VASH2过表达及干扰的稳定转染细胞株,通过定量PCR, western blot、免疫荧光等方法检测细胞中EMT相关表型标志物的改变。通过Transwell、凋亡、干细胞比例等实验验证VASH2对胰腺癌细胞株增殖、侵袭、抗凋亡及干细胞比例的影响。结果：定量PCR及western blot验证过表达及干扰VASH2细胞株成功建立。过表达VASH2的细胞株倾向于间质细胞发展：波形蛋白表达明显上调,而E-钙粘蛋白表达下降。干扰VASH2的细胞株倾向于上皮细胞发展：波形蛋白表达下降,而E-钙粘蛋白表达升高。功能实验证实VASH2具有促进胰腺癌细胞增殖、侵袭、抗凋亡及提升干细胞的比例等作用。进一步探讨发现,VASH2促进MMP2及CXCR4的表达,从而促进肿瘤细胞的侵袭、转移的能力。在凋亡实验中,过表达VASH2上调Bcl-2、ABCC1等抗凋亡基因的表达,从而促进胰腺癌细胞的耐药。另外,我们初步发现VASH2能够通过Shh通路调节EMT的改变,在VASH2过表达细胞中,Shh分泌增加,而相应受体SMO上调,随之核心转录因子Gli-1/Gli-2表达上调；而在VASH2干扰的细胞中,Shh分泌减少,SMO下调,Gli-1/Gli-2表达也相应下调。结论：VASH2能够促进胰腺癌细胞上皮间质转化,从而促进胰腺癌细胞的恶性转化。具体表现为促进胰腺癌细胞增殖、侵袭、抗凋亡及提升干细胞的比例等。另外,VASH2能够借助Shh信号/路上调核心转录因子Gli-1/Gli-2,从而促进胰腺癌细胞发生EMT进而恶性转化。