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原始生殖细胞(Primordial Germ Cells,PGCs)在一定条件下维持未分化状态,经过体外长期培养可以建立胚胎性干细胞系,称为胚胎生殖细胞(Embryonic Germ Cells,EGCs),这是继胚胎癌细胞(Embryonal Carcinoma Cells, ECCs)和胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells,ESCs)之后发现的又一多能性干细胞。本研究以江苏本地白山羊胎儿的生殖嵴为实验材料,从PGCs中分离培养得到EGCs,对其进行体外传代和鉴定等,并且分析了影响山羊PGCs分离培养的一些因素,为本地白山羊ESCs系的建立奠定了一定的基础。实验结果如下:1.小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast cells,MEF),山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblast cells,GEF)和小鼠睾丸支持细胞(Mouse sertoli cells,MSCs)三种细胞在体外生长行为基本相似,贴壁时间短,增殖迅速。试验发现以10μg/mL丝裂霉素-C处理3 h可以有效抑制GEF的增殖,适宜于饲养层的制作;在短期内冻存GEF可以置于-70℃保存,复苏率可以达到培养要求。2.原始生殖细胞在体外培养生长呈鸟巢状和集落状,凸起生长于成纤维细胞饲养层之上,传代后EGCs的形状与PGCs基本相似。3.以共培养,MEF和GEF作为饲养层的三种培养方式中:在培养基中没有添加细胞因子时,仅仅能够观察到原代集落;在培养基中添加10 ng/mL的LIF时,只有以GEF为饲养层才能将得到的原代集落传至二代,其它二种培养方式仅仅可以观察到原代集落。以MSCs为饲养层时,添加细胞因子与否均无法观察到原代集落。4.胎儿生殖嵴在室温(25℃)下消化15 min,使用0.125%胰酶+0.02%EDTA要比0.25%胰酶+0.04%EDTA效果好,前者消化得到的原代集落要多于后者,差异显著(P<0.05);试验比较了两种传代方法对山羊PGCs传代的影响,无论是“挑取集落法”还是“胰酶消化法”,均能将PGCs传至第二代,两种方法差异不显著(P>0.05)。5.在培养液中添加不同浓度和种类的因子:①LIF:10 ng/mL;②LIF:20 ng/mL;③LIF(10 ng/mL)+SCF(10 ng/mL);④LIF(20 ng/mL)+SCF(20 ng/mL),以GEF为饲养层,发现这四种培养方式对于原代集落形成率的差异是不显著的(P>0.05),且均能得到传至第二代的EGCs。6.不同胎龄胎儿分离培养PGCs的效果,结果发现4例冠臀长小于15 mm的胎儿仅观察到一个原代集落,6例大于30 mm的胎儿没有观察到原代集落。7.本试验对山羊第二代EGCs进行冷冻保存,复苏没有获得成功,复苏率为零。