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目的本实验通过建立H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤体外模型，观察黄芪甲苷（Astragaloside IV，AsIV）对H2O2诱导的PC12细胞中t-Akt、p-Akt、t-eNOS、p-eNOS表达的影响，探讨黄芪甲苷是否可以通过激活PI3K-Akt-eNOS信号通路对H2O2诱导的PC12细胞起到抗氧化应激，抗凋亡的保护作用。方法应用四甲基偶氮噻唑蓝比色（MTT）法检测不同浓度H2O2对PC12细胞作用不同时间的细胞存活率，筛选出合适的作用浓度与作用时间，建立氧化应激损伤模型。应用MTT法检测不同浓度的黄芪甲苷单独作用PC12细胞和分别作用于氧化模型的PC12细胞的存活率，筛选出合适的黄芪甲苷浓度后，将细胞进一步分成四组：正常对照组、H2O2模型组、黄芪甲苷+H2O2组、LY294002+黄芪甲苷+H2O2组。应用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测定LDH含量，Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3，通路相关蛋白t-Akt、p-Akt、t-eNOS、p-eNOS的表达情况。结果1MTT法检测细胞存活率结果：与正常对照组相比，黄芪甲苷浓度在10~400nmol/L组单独作用于PC12细胞，对细胞存活率无明显影响作用；PC12细胞活力与H2O2浓度及其作用的时间呈负相关。各实验组PC12细胞活力随H2O2浓度增大而下降，随作用时间延长而下降。其中300μmol/L H2O2组，当作用时间为4h时细胞活力下降约为53%，达到PC12半数致死量，因此选取300μmol/L H2O2作用4h制建立H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤模型。不同浓度黄芪甲苷（100nmol/L、200nmol/L、400nmol/L）预处理组与H2O2模型组相比，PC12细胞存活率均有所提高，而以黄芪甲苷（100nmol/L）处理组作用最为显著(P＜0.05)。2LDH测定结果：与正常对照组相比，H2O2模型组中PC12细胞上清液中LDH活性明显升高（P＜0.05），对细胞具有明显的损伤作用；与H2O2模型组相比，在黄芪甲苷+H2O2组中，黄芪甲苷预处理降低H2O2诱导的PC12细胞上清液中LDH含量（P＜0.05），减少细胞损伤；与黄芪甲苷预处理组（黄芪甲苷+H2O2组）相比，在LY294002+黄芪甲苷+H2O2组中，黄芪甲苷预处理前用LY294002处理后使H2O2诱导的PC12细胞上清中LDH含量上升（P＜0.05）。3western blot法检测结果：与正常对照组相比，H2O2模型组中凋亡相关蛋白Caspase-3的表达明显增高（P＜0.05），促进了细胞凋亡的发生；与H2O2模型组相比，在黄芪甲苷+H2O2组中，黄芪甲苷预处理能显著减少H2O2诱导的PC12细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3的表达，抑制凋亡的进展（P＜0.05），能明显上调Akt及eNOS磷酸化表达（P＜0.05）；与黄芪甲苷预处理组（黄芪甲苷+H2O2组）相比，在LY294002+黄芪甲苷+H2O2组中，黄芪甲苷预处理前用LY294002处理后H2O2诱导的PC12细胞能够明显抑制Akt及eNOS磷酸化表达（P＜0.05），提示黄芪甲苷可能通过激活PI3K-Akt-eNOS信号通路发挥抗氧化应激、抗凋亡作用的。结论黄芪甲苷预处理对H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用，其作用机制可能与激活PI3K-Akt-eNOS信号通路密切相关。