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流感病毒的突变和基因重组使其不断进化促使新病毒产生，对动物和公众健康持续构成威胁。2013年的2月，在中国的上海和安徽省出现的一种新H7N9流感病毒引起人类流感暴发。研究人员对这种新的病原体进行了大量研究发现，活禽市场在其出现和传播中起着至关重要的作用。重要的是，2016年底，该病毒在HA裂解位点处出现了多个碱性氨基酸的插入，演变为高致病性。为避免新出现的H7N9病毒对家禽业和人类健康造成严重损害，迫切需要研制有效的诊断方法。 本研究用A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013(H7N9)和A/Chicken/Guangdong/SD008/2017(H7N9)纯化的全病毒蛋白为免疫原，通过间接ELISA及HI两种方法共同筛选得到22株阳性杂交瘤细胞(2B3、2D7、4E1、5H11、1H3、1C11、1C4、4G4、1E12、1H9、2D9、2H11、15C10、11A4、1G4、1A10、4F2、14F3、8F2、13F4、7E6、4F3)。抗体亚类鉴定结果发现单克隆抗体（单抗）4E1、5H11、1H3、4G4、2H11、1G4、1A10、4F2、14F3、13F4、4F3为IgG1亚型，单抗2B3、2D7、1C11、1C4、4G4、1E12、1H9、2D9、8F2、7E6为IgG2a亚型，单抗15C10、11A4为IgM亚型，轻链κ链。其中，2B3、2D7、1C11、1C4、1E12、1H9、1A10具有较高的HI效价，达71og2以上，其余单抗HI活性较低或无活性;所有单抗ELISA效价均在1∶103-1∶108;但是，1C11与H9亚型抗原有非特异性反应。最后，初步筛选得到6株具有较高的HI效价且能稳定抗H7亚型HA的单抗2B3、2D7、1C4、1E12、1H9、1A10。 针对上述6株单抗，对禽流感病毒HA蛋白的抗原表位进行了分析。首先，采用肽扫描(Pepscan)技术进行筛选，分析发现，这6株单抗均不与原核表达的HA1蛋白、HA2蛋白及其分别截短的蛋白存在特异性反应。其次，利用噬菌体展示技术分析发现，筛选纯化后腹水1A10，其共有序列为NIEPFAW;筛选纯化后腹水1C4，其共有序列为SHRLPFT;但在禽流感的HA蛋白编码的氨基酸(amino acid，AA)序列上均未发现其同源序列。另外，选择单抗1A10与1C4作原始样本孵育，采用多肽芯片分析发现单抗与多肽序列无特异性反应。但是，间接免疫荧光(IFA)分析发现单抗1C4和1A10均能够与病毒HA蛋白发生特异性反应。研究结果提示，单抗1C4和1A10所针对的抗原表位为构象表位。 通过配对实验选出两株生物学活性较好的单抗2D7和2B3为基础材料，用25nm的胶体金颗粒对单抗2D7进行金标，得到标记抗体;单抗2B3以1mg/mL的浓度喷涂于检测线;羊抗鼠IgG以1mg/mL的浓度喷涂于质控线，建立了禽流感病毒H7亚型胶体金试纸条检测方法。利用该胶体金试纸条对H7亚型禽流感病毒进行检测，结果发现该试纸条广谱性良好，特异性良好，灵敏度良好，最小检出的病毒量为1/2个血凝价单位。本研究为H7亚型禽流感现地快速筛查提供有用的技术支撑，满足养殖现场“栏圈边”快速早期筛查需求。