论文部分内容阅读
为了构建具有自主知识产权的山羊乳腺特异性表达载体，利用高保真聚合酶链式反应(PCR)从中国奶山羊基因组中扩增出6个β-乳球蛋白(BLG)基因片段和1个β-酪蛋白(β-casein)基因片段。序列测定结果证明，所获基因片段的DNA序列与已发表的山羊及绵羊相应基因区域具有很高的同源性，5-端调控区中主要的乳腺特异表达调控元件完全相同，不仅说明此两个基因在山羊、奶山羊和绵羊之间是高度保守的，而且说明所用的DNA聚合酶具有很高的保真性，所扩增的基因片段可用于乳腺特异表达载体的构建。将上述基因片段进行组合，构建成一系列乳腺特异性表达载体。将lacZ报告基因分别克隆入自行构建的p205C3载体和从国外引进的pCX及pHC载体，将所获得的重组载体分别用脂质体介导法转染奶山羊乳腺上皮细胞系，经泌乳激素诱导后用X-gal进行酶组化染色，结果表明自行构建的载体驱动报告基因的表达水平高于从国外引进的、已知具有高表达性能的载体。上述重组载体在COS—1细胞和山羊皮肤成纤维细胞不能表达相应的报告基因，表明其具有较好的组织特异性。根据上述实验结果可以得出结论，本研究构建的乳腺特异性表达载体能用于动物乳腺生物反应器的研制。