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背景与目的膀胱癌(膀胱尿路上皮癌)生物学行为复杂,极易发生复发和转移,是我国发病率和致死率最高的泌尿系统恶性肿瘤,严重威胁国民健康。化疗是膀胱癌临床治疗必不可少的重要手段,但化疗药物抵抗是削弱其治疗效果的重要原因。结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF/CCN2)是正常或肿瘤细胞分泌的细胞间基质蛋白,既往研究表明CCN2可结合细胞膜表面的整合素,激活下游信号通路,引起细胞增殖、黏附和迁移、侵袭。CCN2在多种肿瘤中表达异常,参与肿瘤细胞生物学行为及化疗敏感性调节,但在膀胱癌中作用尚不明确。本课题拟在临床、体外和体内水平,分析CCN2在膀胱癌中的表达特征,研究CCN2调节膀胱癌生物学行为和化疗敏感性的作用和机制,以进一步认识膀胱癌发生、发展的生物学过程,为探索提高膀胱癌治疗效果的新方法提供依据。材料与方法1.收集在我科接受手术治疗膀胱患者的组织标本,采用免疫组织化学技术检测肿瘤与正常尿路上皮组织中CCN2蛋白的表达,分析其与肿瘤临床病理特征及患者预后的关系。2.对膀胱癌细胞转染阴性对照或下调CCN2表达的小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),观察CCN2对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭和周期的影响。3.以干扰CCN2基因表达的短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)重组质粒转染T24膀胱癌细胞,筛选获得CCN2表达稳定下调的细胞株,构建裸鼠膀胱癌皮下移植瘤模型,体内研究靶向CCN2表达对膀胱癌生长的影响。4.以化疗药物丝裂霉素C(Mitomycin-C,MMC)处理不同CCN2表达水平的膀胱癌细胞,检测CCN2表达对MMC药物毒性和诱导凋亡作用的影响;收集上述各组细胞蛋白,检测CCN2表达对Akt和Erk信号通路的调控作用。研究结果1.与正常尿路上皮相比,CCN2在非肌层浸润性膀胱癌(nonmuscle invasive bladder cancer,NMIBC)和肌层浸润性膀胱癌(muscle invasive bladder cancer,MIBC)组织中的表达均增高,且在后者中更为显著;CCN2高表达与膀胱肿瘤高分期、分级显著相关,患者复发和进展的风险增高。2.干扰CCN2表达可抑制膀胱癌T24和5367细胞的增殖,阻碍G1→S期转变的分裂周期,并抑制膀胱癌细胞的迁移和侵袭。3.靶向下调CCN2表达可显著抑制膀胱癌裸鼠皮下移植瘤在体内的生长。4.干扰CCN2表达可增强化疗药物MMC对膀胱癌细胞的毒性,促进MMC诱导的细胞凋亡;给予MMC化疗时,与对照组相比,CCN2低表达的膀胱癌细胞中Akt和Erk的磷酸化受到抑制。研究结论1.CCN2蛋白在膀胱癌组织、特别是肌层浸润性膀胱癌中表达增高;CCN2高表达与膀胱癌恶性病理特征(高分期、分级)及不良预后(复发、进展)相关。2.靶向下调CCN2可抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭,阻碍细胞分裂周期,并显著抑制膀胱癌在裸鼠体内生长。3.干扰CCN2表达可抑制Akt和Erk信号通路活化,增强化疗药物MMC对膀胱癌细胞的毒性,促进MMC诱导的细胞凋亡,从而提高膀胱癌对MMC的敏感性。