【摘 要】
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胰腺癌是世界上最常见的癌症之一,是一种致命的恶性疾病,中位生存期为3-6个月,5年生存率低于5%。虽然目前有很好的手术技术和辅助药物治疗,但由于胰腺癌的早期诊断极其困难,手术死亡率高,放疗和化疗对胰腺癌的治疗效果欠佳,因此胰腺癌的预后极差。因此,进一步了解胰腺肿瘤发生的核心分子机制和探索新的治疗靶点对于提高这些患者的存活率至关重要。长链非编码RNA(lncRNA)由超过200个核苷酸组成的,其在正
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胰腺癌是世界上最常见的癌症之一,是一种致命的恶性疾病,中位生存期为3-6个月,5年生存率低于5%。虽然目前有很好的手术技术和辅助药物治疗,但由于胰腺癌的早期诊断极其困难,手术死亡率高,放疗和化疗对胰腺癌的治疗效果欠佳,因此胰腺癌的预后极差。因此,进一步了解胰腺肿瘤发生的核心分子机制和探索新的治疗靶点对于提高这些患者的存活率至关重要。长链非编码RNA(lncRNA)由超过200个核苷酸组成的,其在正常细胞和癌细胞中具有重要的基因调控作用,包括基因组印记、表观遗传调控、选择性剪接、细胞分化和致癌作用。Linc-RoR作为经典的长链非编码RNA,可调节分化的细胞重编程为诱导的多能干细胞(iPSC),并在许多肿瘤的进展中起重要作用。目的:检测胰腺癌细胞中的Linc-RoR的表达量的情况,明确Linc-RoR对胰腺癌细胞的生物学行为的影响,并探究其潜在的分子机制,这为Linc-RoR可以应用于胰腺癌的分子靶向治疗提供坚实的理论依据。方法:1、采用荧光定量PCR分析Linc-RoR在胰腺癌细胞BxPC-3、SW1990、PaTu8988中的mRNA相对表达量;2、在BxPC-3和SW1990中转染pCDH-RoR质粒,在SW1990和PaTu8988中转染sh-RoR质粒,验证质粒效率;3、通过CCK-8实验和平板克隆形成实验分析Linc-RoR调控胰腺癌细胞增殖和克隆形成的能力;4、应用划痕实验以及Transwell实验分析Linc-RoR调控胰腺癌细胞迁移能力和侵袭能力;5、通过Western blot验证Linc-RoR与胰腺癌细胞EMT进程中有关系的蛋白表达的关系,通过Western blot分析Linc-RoR调控与侵袭相关的蛋白基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达;6、通过Western blot探讨Linc-RoR调控胰腺癌细胞上皮间质转化的机制。结果:1、Linc-RoR在三种胰腺癌细胞中有差异性表达,Linc-RoR表达量在PaTu8988中最高,在BxPC-3中最低。2、上调Linc-RoR后,可促进胰腺癌细胞的增殖能力以及克隆形成能力;下调Linc-RoR后,可以抑制胰腺癌细胞的增殖能力以及克隆形成能力。3、上调Linc-RoR后,可以促进胰腺癌细胞的迁移能力及侵袭能力;下调Linc-RoR后,可以抑制胰腺癌细胞的迁移能力及侵袭能力。4、上调Linc-RoR后,MMP2及MMP9的表达量增加;下调Linc-RoR后,MMP2和MMP9表达量降低。5、上调Linc-RoR后,N-cadherin、vimentin和Snail蛋白表达升高而E-cadherin蛋白表达下降;相反下调Linc-RoR后,N-cadherin、vimentin和Snail蛋白表达下降而E-cadherin蛋白表达升高。6、上调Linc-RoR后,胰腺癌细胞中YAP和MOB1蛋白表达增高,p-YAP、p-MOB1、p-LATS1、LATS1、MST1和MST2蛋白表达降低。下调Linc-RoR后,胰腺癌细胞中YAP和MOB1蛋白表达降低,p-YAP、p-MOB1、p-LATS1、LATS1、MST1和MST2蛋白表达增高。结论:1、Linc-RoR具有促进胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的生物学作用。2、Linc-RoR通过调控Hippo信号通路以促进胰腺癌细胞的上皮间质转化。
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