【摘 要】
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随着胚胎工程技术在人类辅助生殖领域和家畜繁殖领域中的应用,科研工作和商业活动需要大量的优质胚胎。卵母细胞经体外成熟(In Vitro Maturation, IVM)和体外受精(In Vitro F
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随着胚胎工程技术在人类辅助生殖领域和家畜繁殖领域中的应用,科研工作和商业活动需要大量的优质胚胎。卵母细胞经体外成熟(In Vitro Maturation, IVM)和体外受精(In Vitro Fertilization, IVF)后能够提供大量胚胎。但与体内胚胎相比,体外胚胎质量一直是困扰胚胎体外生产的主要问题,这严重影响了体外受精和动物克隆技术的实际应用。在影响卵母细胞体外成熟和体外受精的诸多因素中,活性氧自由基(Reactive Oxygen Species, ROS)是降低卵母细胞体外成熟质量和受精后胚胎发育能力的主要因素之一。谷胱甘肽(Glutathione, GSH)作为卵母细胞成熟受精过程中最重要抗ROS物质,能够提高卵母细胞成熟受精后的胚胎质量。本实验研究了三种硫醇类物质:半胱氨酸、胱氨酸和β-巯基乙醇对卵母细胞GSH合成的影响;或在精子获能和体外受精过程中给予足够剂量的GSH以提高卵母细胞成熟受精后胚胎质量的效果。实验结果显示:1.半胱氨酸和胱氨酸能够促进小鼠体外成熟卵母细胞合成GSH,提高体外受精后胚胎发育能力和囊胚细胞数,这种提高具有浓度依赖性。胱氨酸的最佳浓度为200μM。更高浓度时会降低胚胎质量。2.小鼠卵母细胞体外成熟液中添加β-巯基乙醇能够促进GSH合成,在200μM时才能够显著提高胚胎发育能力。更高浓度时则会起相反作用。3.在精子获能液中添加GSH能够提高获能效率继而提高小鼠精子的受精能力,这种提高依赖GSH的浓度。4.在小鼠体外受精液中添加GSH,能够显著提高受精率、囊胚率,并且这种提高依赖于GSH浓度。
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