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该实验室从嗜热菌中克隆到了耐热碱性磷酸酯酶(FD-TAP)基因,并完成了基因的全序列测定和在大肠杆菌中的高表达.在此基础上,该论文对FD-TAP进行了多个方面的研究,主要包括五个方面的工作:一、互通计算机辅助分析,发现在耐热碱性磷酸酯酶(FD-TAP)的N端存在着26个氨基酸的信号肽序列;二、在分离纯化得到纯度约为90%的TAPND27的基础上,对其结晶条件进行了初步的摸索;三、对去除了信号肽耐热碱性磷酸酯酶(TAPND27)进行了N端和C端的定点缺失,得到了N端分别缺失8、16、25个氨基酸的三个缺失体pTAPND35,pTAPND43和pTAPND52以及C端分别缺失10和30个氨基酸的两个缺失体pTAPCD10和pTAPCD30.将这些缺失体在大肠杆菌MPH44中进行高表达并测定了它们的酶活,结果表明TAPND35和TAPCD10保持了较高的活性而其余三个缺失体则失去了酶活;四、信号肽研究和功能区域定位研究中,得到了N端有不同程度缺失且mRNA二级结构能量不同的缺失子.利用GCG分析软件计算得到了不同长度mRNA所形成的二级结构的能量,结合42℃时基因的表达量,对它们之间的相关性进行了分析.发现主要是翻译起始密码子两侧各40个核苷酸形成的二级结构影响基因表达.并根据de Smit,M.H等人所提出的二级结构能量和基因表达量之间关系的模型进行了模拟,发现FD-TAP能较好地符合这个模型;五、通过对FD-TAP活性位点两侧的E(94)和S(96)进行了定点突变,得到了三个突变子E94S,S96A和E94SS96A.对这三个突变子进行了一些酶学性质的测定,发现E94S的比活力上升了8倍,Tm下降了3℃,最适反应温度上升了20℃;S96A的比活力上升了1倍,Tm下降了2℃,最适反应温度上升了5℃;E94SS96A的比活力下降了50%,Tm下降了19℃,最适反应温度上升了5℃.这说明了活性位点E(95)两侧的氨基酸残基不仅和酶蛋白的催化能力,而且与酶的热稳定性和亲热性有很大的关系.这个工作为提高酶的比活力和研究酶的热稳定性及亲热性提供了突变方向.