NIMA（Never in Mitosis,Gene A）丝氨酸/苏氨酸激酶7（NEK7）是哺乳动物有丝分裂纺锤体的调节剂,被认为是与炎症小体相关的炎症性疾病的药物靶标。但是,大多数可商购或报道的重组NEK7蛋白要么是无活性的,要么纯度低,或者与大分子量标签融合在一起（需要进一步去除）,或者在昆虫表达系统中融合（成本高且耗时）。极低的纯度或高成本限制了 NEK7抑制剂的药理研究和开发。由于原核细胞中导致NEK7低纯度的原因尚不清楚,因此十分有必要先找寻原因。否则,将很难创建一种简单,快速且省时的方法来表达和纯化得到高纯度和高活性的NEK7,尤其是在大肠杆菌中表达带有小标签NEK7的情况下。因此在原核生物中大量表达、分离、纯化目的蛋白——重组人NEK7蛋白十分有必要,并利用所得到的重组人NEK7蛋白进行后续研究,为寻找能够与NEK7作用的天然小分子化合物奠定基础。构建N末端带有His-tag与C末端带有His-tag的NEK7蛋白表达载体,诱导大肠杆菌BL21（DE3）表达或BL21（DE3）pLysS表达,通过Ni2+亲和柱层析或Co2+亲和柱层析先纯化分离得到的可溶性NEK7蛋白,再通过离子交换和葡聚糖凝胶柱层析等方法得到纯度更高的NEK7蛋白。通过MALDI-TOF MS/MS检测纯化得到高纯度NEK7蛋白是否与目标蛋白一致,采用Kinase-Glo Assay检测激酶活性是否在纯化中得以保留,通过Thermal Shift Assay检测NEK7激酶的构象是否正确,且该方法可用于筛选NEK7配体化合物。通过对具有N末端His-tag与C末端His-tag的全长NEK7表达进行比较研究,阐明导致NEK7在大肠杆菌中纯度低的原因。结果表明,N末端标记的蛋白对大肠杆菌有毒会导致翻译产物不完整。C末端标记的NEK7-His6比N末端标记的纯度更高。Ni2+亲和树脂一步纯化得到的纯度为91.7%,符合大多数激酶测定的标准。采用两步法和三步法,蛋白质纯度分别为94.7%和～100%。纯化过程中纯化的NEK7能够保持其激酶活性和正确的构象,以及化合物与蛋白质的相互作用能力,通过Thermal Shift Assay筛选出2个具有与NEK7相互作用的配体小分子。C末端的His标签改善了在大肠杆菌中表达的重组人NEK7的纯度。我们优化的方案可以在大肠杆菌中提高His标记的NEK7的产量和纯度,并且其激酶活性和生物物理特性得以保留,可采用Thermal Shift Assay高通量筛选NEK7配体化合物。对香椿属次级代谢产物的研究发现许多结构独特的柠檬苦素类化合物,具有多种药理活性,如细胞毒、抗炎、抗多药耐药（AMDR）等。通过分离提取Toona ciliataM.Roem中的有效成分,我们对分离提取得到的柠檬苦素类化合物进行抗炎活性初筛以及Thermal Shift Assay。虽然通过Thermal Shift检测分析,ciliatone D并不是NEK7的配体化合物,但是利用LDH进行抗炎活性初筛的结果表明ciliatone D具有较好的抗炎活性,随后对其进行抗炎机制初步探索显示,ciliatone D抑制炎症相关细胞因子Casp-1的成熟和IL-1β的释放,还能减少GMDMD的裂解并阻止小鼠巨噬细胞焦亡,ciliatone D具有成为治疗NLRP3炎症小体活化相关炎症疾病药物的潜力。