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布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的一种人兽共患性传染病，它以流产和发热为主要特征，极大阻碍了畜牧业的发展，严重危害了人类的健康。布鲁氏菌病是世界范围内影响公共卫生的一个难题，发病后如果转入慢性就无法根治。目前，我国布鲁氏菌病的流行状况仍然令人堪忧，严峻的疫情形势为该病的预防和检测提出了更高的要求。本研究拟选取牛布鲁氏菌毒力基因Virb8作为研究对象，构建其原核表达载体，获得高纯度蛋白后，利用此蛋白作为包被抗原构建检测奶牛布鲁氏菌血清的iELISA方法，并与传统的虎红平板凝集试验进行对比，探讨所建立的iELISA检测方法用于生产实践的可行性。通过查阅牛布鲁氏菌毒力基因Virb8序列（Gen Bank:AF226278.1），设计一对特异性引物，在特异性引物的上游和下游分别引入BamHI酶切位点和HindIII酶切位点。提取布鲁氏菌A19疫苗株的基因组DNA后，将其作为模板扩增出Virb8的基因片段，片段大小为720bp。将目的基因连接到pEASY-T3上，然后把产物转入到大肠杆菌感受态细胞DH5α中，构建完成重组表达质粒pET-T3-Virb8。随后利用限制性内切酶BamHI和HindIII对pET-T3-Virb8和pET-32a(+)质粒同时进行双酶切鉴定，证明载体已构建成功。利用T4DNA连接酶将试验所需的目的基因同表达载体进行连接，转化入DH5α，构建出重组表达质粒pET-32a-Virb8，然后将pET-32a-Virb8转入E.coli BL21(DE3)中，用1mM/L的IPTG对其进行诱导表达，经SDS-PAGE分析和Western-blot分析鉴定后，采用Ni-NTASpin Kit对蛋白进行纯化。将获得的目的蛋白作为包被抗原确定iELISA方法的最佳包被浓度、最佳包被条件、最佳二抗稀释度及阴阳性临界值，同时进行敏感性试验和重复性试验，用所建立的iELISA方法对235个临床奶牛血清样本进行检测，并与虎红平板凝集试验进行比较。通过实验，成功的构建起了布鲁氏菌毒力Virb8的克隆表达载体，并且获得了大量的目的蛋白，所建立的iELISA方法具有稳定、灵敏的特点，与虎红平板凝集试验的符合率可达97.02%，有效地证明了该iELISA方法可以应用于牛布鲁氏菌病血清学诊断，为生产实践中布鲁氏菌病的预防和检测提供了便利。